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(無題) 削除/引用 No.13181-5 - 2025/12/16 (火) 10:24:16 - う SN比の小さいレンジで観察されていると思いますが、通常コラーゲンの自家蛍光が気になるほど強いことは無いので、何社かコーティング用コラーゲンを買ってみたらどうですか。あるいはポリリジンや、他のコーティングを試すとか。 私なら別のコラーゲンを２，３個買って、それでもだめなら他のコーティングにします。

(無題) 削除/引用 No.13181-4 - 2025/12/15 (月) 21:13:01 - toto 自家蛍光が強い場合は近赤外でも邪魔になることがあり、かえって405nm励起で440nm近辺の蛍光を通すCFP用のフィルタセットのほうがまだましだったりもします。それほど強くない自家蛍光ならスペクトライメージングで撮れることもありますが、なかなか気を遣います。 それよりもコラーゲンのソースを変えて、自家蛍光の低いものを探された方が得策のように思います。自分でコラーゲンコートしたチャンバースライドで自家蛍光が気になったことはないので、たまたま、今使っておられるコラーゲンがそういうものだったのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.13181-3 - 2025/12/15 (月) 18:19:41 - ema 長波長での蛍光染色がまず第1選択ですが、自施設、共同研究先に LeicaのThunder　や　スペクトラム顕微鏡などがあればソフト上の処理によって自家蛍光の除去が可能です。

(無題) 削除/引用 No.13181-2 - 2025/12/13 (土) 11:03:49 - ossi 励起光波長が488 nmなど比較的短い場合は自家蛍光とのクロストークが見えることも多いです。 その場合、647 nmやさらに近赤外の励起光に対応した蛍光色素で抗体染色すると、自家蛍光の問題が改善することがあります。 コラーゲンの代替物はフィブロネクチンやラミニンなどが使えるかもしれませんが、どのような細胞の初代培養かで選択肢が異なると思います。 コーティング剤は初代培養においてかなり重要な要素なので、お使いの細胞種とアッセイ系で論文報告のある代替品を優先的に試すべきでしょう。 コラーゲンの濃度を下げて自家蛍光を低減することも検討に値するかもしれません。

コラーゲンコートの自家蛍光 削除/引用 No.13181-1 - 2025/12/13 (土) 00:25:32 - rta コラーゲンコートしたスライドチャンバーに初代培養の細胞を播種して培養し蛍光抗体法で観察したいのですが、コラーゲンの自家蛍光で困っています。このような実験をされている方いましたら、コラーゲンの代替物など含めどのように対応されているかご教示ください。

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