Bio Technical フォーラム

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マウス角膜上皮細胞の組織片培養の継代 トピック削除
No.13216-TOPIC - 2026/02/14 (土) 11:06:31 - KK
修士課程1年のものです。
現在、マウスの角膜片をdishに置いて培養し、outgrowthしてきた細胞を剥離してvitro培養に持っていく、という形で角膜上皮細胞を手に入れようとしています。ですが、角膜片から生えてくる細胞なのですが、ディスパーゼiiで30分処理しても全く剥がれず、その後にTrypLE express(もしくはトリプシンEDTA)で5-10分処理しても全く剥がれません。ピペッティングしたり、最終的にはセルスクレーパーで無理やり剥がしたりしていますが、やはりほとんどの細胞が死滅してしまい、24wellでコンフルエントに生えていても継代すると96wellにも不十分な量の細胞しか得られません。
どなたか正しい細胞の剥離処理の仕方をご教示いただけないでしょうか。よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.13216-3 - 2026/02/16 (月) 13:14:36 - KK
ありがとうございます。
コートは使用しておりません。以前はコラーゲンコートを使用していました。

(無題) 削除/引用
No.13216-2 - 2026/02/16 (月) 09:39:27 - gdtm
dishのコーティングはされていますか?
コーティングで接着様式が変われば剥がれやすくなるかもしれません。

マウス角膜上皮細胞の組織片培養の継代 削除/引用
No.13216-1 - 2026/02/14 (土) 11:06:31 - KK
修士課程1年のものです。
現在、マウスの角膜片をdishに置いて培養し、outgrowthしてきた細胞を剥離してvitro培養に持っていく、という形で角膜上皮細胞を手に入れようとしています。ですが、角膜片から生えてくる細胞なのですが、ディスパーゼiiで30分処理しても全く剥がれず、その後にTrypLE express(もしくはトリプシンEDTA)で5-10分処理しても全く剥がれません。ピペッティングしたり、最終的にはセルスクレーパーで無理やり剥がしたりしていますが、やはりほとんどの細胞が死滅してしまい、24wellでコンフルエントに生えていても継代すると96wellにも不十分な量の細胞しか得られません。
どなたか正しい細胞の剥離処理の仕方をご教示いただけないでしょうか。よろしくお願いします。

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