Bio Technical フォーラム

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ウエスタンブロットの転写について トピック削除
No.13225-TOPIC - 2026/03/07 (土) 16:16:51 - yufu
初質問のため、至らぬ点がありましたら申し訳ございません。
ウエスタンブロットの転写について質問です。

転写後のPVDF膜でバンドの検出を行ったところ、ブロット上に白抜けた部分や一部には空気が入ったような部分のある結果になりました。
セミドライ式システムで行っており、ろ紙やPVDF膜、ゲルを置く際に空気が入っていない事を確認したにもかかわらずこのような結果になり困っています。

気になる点としては、2枚まとめて転写を行ったため、120mA/枚として240 mA, 1時間で転写を行ったのですが、終わった後に転写装置が温かかったことです。
過熱されすぎて、気泡が発生する事も考えられるのでしょうか?

このような結果になる原因や解決方法についてご存じでしたらご教示いただきたいです。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.13225-2 - 2026/03/07 (土) 18:47:16 - fvgbhn
定電圧ならば転写するゲルの枚数関係なく一定条件でできると思うのですが、どうでしょうか。セミドライ式だと定電圧設定の方が一般的と思うし。そのあたりメーカーに相談してみたらどうでしょうか。至適条件や上限設定など基礎データを保有していると思うので。

通電中に抵抗値がだんだん上がってくるので、終わった後である程度温度が上がる(暖かいなと感じるくらい)のは正常です。気泡が生じるほどの温度上昇や、触って熱いと感じるようならば何か問題があると思います。セミドライで通電時間が1時間というのは長すぎのように思うのですがどうでしょうか。通常はせいぜい15〜30分くらいな気がするので。

セミドライは短時間で完了する点は良いのですが、高分子量蛋白質の転写が苦手で、またセティングの際に空気が入りやすいです。ただ気泡の問題については、ろ紙に染み込ませたり、膜やゲルに付着したbufferの量をなるべく多くした状態で(結構濡れた状態で)セッティングした後で、最後に周りに溢れた余剰のbufferを拭き取ってから蓋閉めるような感じですると、ある程度、改善できると思います。

多くのbuffer量を必要とし、通電時間も長い(といってもせいぜい90分くらいですが。)wet式の方が、やや面倒だけど、初心者でも失敗は少ないです。

ウエスタンブロットの転写について 削除/引用
No.13225-1 - 2026/03/07 (土) 16:16:51 - yufu
初質問のため、至らぬ点がありましたら申し訳ございません。
ウエスタンブロットの転写について質問です。

転写後のPVDF膜でバンドの検出を行ったところ、ブロット上に白抜けた部分や一部には空気が入ったような部分のある結果になりました。
セミドライ式システムで行っており、ろ紙やPVDF膜、ゲルを置く際に空気が入っていない事を確認したにもかかわらずこのような結果になり困っています。

気になる点としては、2枚まとめて転写を行ったため、120mA/枚として240 mA, 1時間で転写を行ったのですが、終わった後に転写装置が温かかったことです。
過熱されすぎて、気泡が発生する事も考えられるのでしょうか?

このような結果になる原因や解決方法についてご存じでしたらご教示いただきたいです。

よろしくお願いいたします。

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