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ありがとうございました 削除/引用 No.1661-5 - 2013/04/22 (月) 10:21:00 - りほ

(無題) 削除/引用 No.1661-4 - 2013/04/22 (月) 09:58:29 - ~ >特定の因子依存的にユビキチンが修飾を受けることを確認しています。 ユビキチンが修飾を受けて新しい機能を持つと考えているのであれば、 ユビキチンにノックインしてその修飾を受ける配列をつぶせませんかね。 その修飾を受けて新しい機能を持つ前のユビキチンの機能を、ノックインしたユビキチンが担うことができれば、 見たい現象について修飾を受けたユビキチンの機能の差分を見ることができるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1661-3 - 2013/04/20 (土) 15:14:45 - KY どういう実験系なのか把握できませんが、E3 ligaseの機能解析をしているとすると、 その遺伝子の野生型タンパク質を発現しているときは、siRNAによる細胞死を抑制できるが、ユビキチンライゲース不活性体ではレスキューできなくなれば、そのライゲース活性が必要だとまず言うことができます。 それともその細胞死自体とは別の機能を研究しているのでしょうか。 もしくは、目的の現象が誘導されるときにプロテアソームインヒビター（MG132とかラクタシスチンとか）加えてみては。

(無題) 削除/引用 No.1661-2 - 2013/04/20 (土) 15:02:10 - おお ユビキチンライゲースとか、そのあたりをKDしてみてはどうでしょうか、ユビキチンする相手によってライゲースやそのコファクターになるたんぱく質は違ってきますので。複数あるうちどれが関与しているとかいう話はできるかもしれません。 あるいはデユビキチネーションされるなら、とくに小胞輸送とか、ユビキチンを付けたり外したりし制御しているようなものであれば、デユビキチネーションのエンザイムも複数ありますし、片っ端からだとちょっとたくさんあり過ぎるかもしれませんけど、うまく絞ることができれば(たとえばいろいろな細胞でその現象と発現にそうかんがありそうなものがしぼれるなら)そういうやつからKDしていったりできるような気がします。

細胞に必須の因子の機能を調べるには 削除/引用 No.1661-1 - 2013/04/20 (土) 14:13:08 - りほ ある現象にユビキチンが関与するかどうか検討したいのですが、siRNAでノックダウンすると細胞が死んでしまい（当たり前なのですが...）、調べられません。。。どのようなアッセイ方法なら良いでしょうか？ちなみに、基質などは分かっておらず、特定の因子依存的にユビキチンが修飾を受けることを確認しています。

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