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(無題) 削除/引用 No.2382-6 - 2013/09/18 (水) 17:32:21 - う >このサンプル（ゲノムDNA）を使って、サイトカイン・ケモカインプライマーなどでリアルタイムPCRを行った場合、結果は正確なのでしょうか。 ？ 他の方もおっしゃっていますが、何が目的でしょうか？ サイトカインやケモカインの「何を」ゲノムを使ってリアルタイムPCRで定量しようと？ サイトカインやケモカインの発現量なら、発現の増加があるのはmRNAであって それから作るcDNAを用いるのなら理解できます。 ゲノムを使って発現量を定量はできませんから・・・（私が無知でできるのでしょうか？）

(無題) 削除/引用 No.2382-5 - 2013/09/18 (水) 17:30:49 - AP >というのも、通常ですと、サイトカイン・ケモカインプライマーなどを利用してリアルタイムPCRを行う場合、cDNAを使用するからです。 この時の目的によってはgenomic DNAでも等価のことができるかもしれないが、、、 ストレートに考えると、cDNAでリアルタイムPCRというのは遺伝子の発現量をRNAのコピー数として計測する手法である。この目的でゲノムDNAを鋳型にしても全く意味が無いということは、わかるでしょう？ >ある実験で細胞のゲノムDNAを抽出し、18SrRNA領域に設定したプライマーでリアルタイムPCRを行いました。 rDNAは多コピー（真核生物なら数百のオーダー）がタンデムに並んでいて、このコピー数は個体差がある。検体のゲノムの中にrDNAが何コピーあるかを求める実験だとすれば、リアルタイムPCRを用いたという筋が通る。

(無題) 削除/引用 No.2382-3 - 2013/09/18 (水) 17:25:49 - R 何がしたいのかは分かりませんので、何をもって正確とするかは分かりませんが、、、 cDNA用のプライマーセットでゲノムをPCRする際には、 大抵イントロンを挟むことになると思いますので、、、 PCR productの長さを基にelongationの時間を設定し直せば、 PCRがかかると思われます。 (PCR産物の長さ次第ですが) 最近、PCR関連の質問が多い気がしますが、 PCRについて習ったり、ご使用の酵素やキットの説明書は読まないのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2382-2 - 2013/09/18 (水) 17:18:29 - おお ゲノムかcDNAを使うかは目的によるので、正確かどうかといっても目的次第というか、目的によっては全く意味がありません。

ゲノムDNAを使用したリアルタイムPCR 削除/引用 No.2382-1 - 2013/09/18 (水) 16:49:29 - ゲノムDNA お世話になっております。 ある実験で細胞のゲノムDNAを抽出し、18SrRNA領域に設定したプライマーでリアルタイムPCRを行いました。 このサンプル（ゲノムDNA）を使って、サイトカイン・ケモカインプライマーなどでリアルタイムPCRを行った場合、結果は正確なのでしょうか。 というのも、通常ですと、サイトカイン・ケモカインプライマーなどを利用してリアルタイムPCRを行う場合、cDNAを使用するからです。 しかし、抽出したのはゲノムDNAであり、使用できるなら使用したいなあと考えております。 御教授宜しくお願い致します。

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