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(無題) 削除/引用 No.2410-2 - 2013/10/03 (木) 16:32:25 - mon 回答がないようなので、大腸菌発現系だけでの少ない経験から申しますと、 結論はやってみないと分からないとなりますが、 [UP]-[Promoter]-[sequence]-[SD]-[orf]-[terminator] 可能です。 [sequence]の配列がGC-richや palindrome（特にSD配列に被ると）ですと、発現量は下がるようです。長さは、関係する種のゲノム配列を参考にすると良いかと思いますが、50塩基くらいは大丈夫だと思います（長くなると予期せぬ高次構造で発現量は下がる可能性は高くなります）。 [UP]-[Promoter]-[sequence]-[SD]-[orf]-[SD]-[orf]-[terminator] 可能です。 大腸菌ですと、[orf]の末端に[SD]が内在している遺伝子が多いので、新規に繋ぐ場合はそれを利用して -[SD]-[orf1(SD)]-[orf]- とした方が失敗が少ないと思います。 また、状況により[UP]-[Promoter]上流にも[terminator]を入れておいた方が良いかもしれません。

PromoterからSD配列までの距離 削除/引用 No.2410-1 - 2013/09/30 (月) 00:36:57 - SD お世話になります。 ラボで初めてVectorを改造するための設計を行っています。 適用する生物種を変えるため、プロモーターの置換等を考えているの ですが、プロモーターとSD配列間の距離はどの程度まで変更しても 大丈夫なのでしょうか。 例えば野生型のプロモーターを使い [UP]-[Promoter]-[SD]-[orf]-[terminator] となっているところに何らかの[sequence]を挿入し [UP]-[Promoter]-[sequence]-[SD]-[orf]-[terminator] として、WTと違う長さにしても大丈夫なのでしょうか。 また [UP]-[Promoter]-[sequence]-[SD]-[orf]-[SD]-[orf]-[terminator] のように人工オペロンを構築する事は可能でしょうか。 初歩的な質問かもしれませんが、よろしくお願いします。 オススメの参考書等あれば教えて頂けると嬉しいです。

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