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(無題) 削除/引用 No.2611-4 - 2013/12/04 (水) 00:34:35 - 名無し あれは蛋白質複合体としても異常に大きいので、連続的密度勾配遠心法で比較的容易に他のプロテアーゼ活性から分離できるよ。20Sと26Sもそれで分けられたとおもう。それか、ネーティブ電気泳動して分離して、そのままゲルを蛍光基質に漬けて活性染色する方法もある、ボワーって言う感じであんまりクリアじゃないけど。 プロテアソーム活性の変化とユビキチン化活性の変化は基本的に別々の事象とおもうんだが。 量的な変化はウェスタンやRTPCRで見ればいいんじゃね。サブユニットが沢山あるので、１つじゃなくていくつかについて見ておくほうがいいかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.2611-3 - 2013/12/02 (月) 02:53:30 - おお 精製すれば解決すると思います。

(無題) 削除/引用 No.2611-2 - 2013/12/01 (日) 21:57:14 - 独り言 普通、ちゃんとプロテアソーム活性を計るときは細胞丸ごとではなくて、リシスした細胞をフラクションに分けて、プロテアソーム活性のあるフラクションでSuc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMCなどの蛍光強度を計るのではないでしょうか？だから、ユビキチンの結合は関係ないし、プロテアソームの量もWBで確かめているはずだし。 安易に細胞に蛍光物質を入れるだけの実験はかなり雑なのだと思います。

プロテアソーム活性測定方法について 削除/引用 No.2611-1 - 2013/12/01 (日) 19:12:33 - onomori 初めて投稿させていただきます。 現在、培養細胞を用いてある条件下でのプロテアソーム活性低下への影響について調べようと思い、プロテアソーム活性を測定しようと思っております。 プロテアソーム活性測定には主に �@蛍光標識ユビキチンの分解を蛍光強度で測定 �ASuc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMCの分解を蛍光強度で測定 �B20Sプロテアソームの酵素活性を測定 などのような方法があると思います。 しかし上記の方法では、例えばプロテアソーム活性が低下した場合に、それが他のユビキチン化タンパク質との競合によるものなのか、それともユビキチン結合の阻害によるものなのか判断できないのではないかという印象を受けます。またプロテアソームの構成成分の産生量が少なくなっている可能性があると思います。 これらの問題を打開？するような方法はあるのでしょうか。 プロテアソーム活性測定方法に関して知識がある方、どうかご教授頂きたいです。 素人な質問で大変恐縮ですが、よろしくお願い致します。

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