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(無題) 削除/引用 No.2687-17 - 2013/12/26 (木) 12:43:20 - seven 個人的には手法やコンタミ率からみると液体培養の植菌や分注とかの操作中にコンタミしているのではないかと思います。 他の人に協力してもらうのが可能なら、同じ操作をしてもらってコンタミするかどうか確認してみてはどうですか。 他の人でも同様にコンタミが起こるなら、器具や装置の滅菌が不十分だと考えられます。 起こらない場合は手技の問題だと思います。

(無題) 削除/引用 No.2687-16 - 2013/12/25 (水) 19:58:24 - sekieku 弘法さん 振とう機はおそらくエアーインキュベーター式です。 今度振とう機の掃除を行う予定です。 sevenさん 実験の流れとして 冷凍されている酵母をとりだしてYPD寒天培地で３０℃で設定したインキュベータで一晩培養 培養したもののコロニーを爪楊枝でとりYPD液体培地で振とう機で一晩培養 培養したものをYPD寒天培地で2日間３０℃に設定したインキュベータで培養して これを冷蔵庫に保存して１か月使っています 作成したものを冷蔵庫から取り出してYPD液体培地で振とう機で一晩培養します こちらを集菌しpbs(-)をまぜプラズマを当てています。 プラズマをあてる作業をしているときは無菌操作ができないのでしていませんがほかの作業のときは無菌操作をしています。 その後セルカウントをおこない1×10^3に合わせて培養を行います サンプル数は現在は１２本作っています。 これを３日間培養し24ｈごとにセルカウントを行っています だいたい２日目のセルカウントのときにコンタミしてるような気がして ３日目に白く濁っていることがわかります。 １２本のうち１〜２本のコンタミが見つかっています

(無題) 削除/引用 No.2687-15 - 2013/12/25 (水) 15:52:20 - seven 増殖はある程度の温度になったら促進されて、凍結や冷蔵状態では抑制されているので培地を使用まで冷蔵保存していたり、培養直前に凍結していた試薬などを添加した場合では手技の問題なのかこれらの溶液がすでにコンタミしているかは判別できません。 実験の流れや使用した培地、添加物などをくわしく書いたほうが具体的な回答が得られやすいと思います。

(無題) 削除/引用 No.2687-14 - 2013/12/25 (水) 15:50:30 - 弘法 液培でしたか。プレートはコンタミしたことは無いんですか？環境中に飛散している大腸菌が問題だとすれば、プレートも同様にコンタミするはずですよね。 もし、プレートにコンタミが無いなら、液培のために植菌する操作とそれ以降の問題ということになると思います。 振とう機はエアーインキュベーター式ですか、ウォーターバス式ですか？後者なら、振とう中にフタから中にバスの水が入ってきているのでは？ フラスコはどうやってフタしていますか？

(無題) 削除/引用 No.2687-13 - 2013/12/25 (水) 14:18:55 - おお 大腸菌だと分裂の速度は10-20分に一回、イーストは2時間ぐらいかかります。

(無題) 削除/引用 No.2687-12 - 2013/12/25 (水) 14:09:05 - sekieku YPD液体培地で大腸菌が成長する速度がわかればコンタミした時がわかると思いますがどなたか実験したことありませんか？

(無題) 削除/引用 No.2687-11 - 2013/12/25 (水) 13:09:31 - seven どの段階でコンタミが起こっているか確認したほうがよいのでは？ もし、ストックから起こして培養しているような場合だと、その段階ですでにコンタミしている可能性も考えられます。

(無題) 削除/引用 No.2687-10 - 2013/12/25 (水) 13:02:37 - おお >[Re:9] sekiekuさんは書きました : > 大腸菌がYPD液体培地で温度30の振とう機に入れた場合大腸菌は増殖するのでしょうか？ します。

追加で質問です 削除/引用 No.2687-9 - 2013/12/25 (水) 12:52:41 - sekieku 大腸菌がYPD液体培地で温度30の振とう機に入れた場合大腸菌は増殖するのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2687-8 - 2013/12/25 (水) 12:48:51 - おお かなりの酵母を扱う人が、大腸菌も使っています。酵母用のプラスみどは大腸菌で組かえしますので。何かsterilizeされていない0.2umのフィルターとか使っているとかないでしょうか、、、

回答してくださったみなさんありがとうございます 削除/引用 No.2687-7 - 2013/12/25 (水) 12:48:02 - sekieku 弘法さん 液体培養していまして、実験をして培養開始して2日目に顕微鏡でみると酵母以外のものが見えて来ます。 3日目に液体を見ると白く濁っているのでコンタミと判断しています。 モモさん コロニーを作成するときは別々ですが実験時の液体培養のときは振とう機で同じものを使用しています。 波平さん ピペッターは普段は別々のものを使用していますが今回は片方が壊れてしまっていたのっで同じのを使用しています。 おおさん 消毒はアルコールを使って実験器具を掃除することです 無菌操作は火を使って行っています。 Harmoniaさん 大腸菌を使っている人はコンタミしたことはないそうです。

(無題) 削除/引用 No.2687-6 - 2013/12/25 (水) 12:24:18 - Harmonia >共同実験者でカビと大腸菌を使っている人がいます。 ということは、その方も自分のサンプルがコンタミを起こして困っていますね。 何とかしてもらうしかないです。 そうでなければ、原因はそこではないはず。

(無題) 削除/引用 No.2687-5 - 2013/12/25 (水) 09:08:46 - おお かなまいしんやあんぴしりんは入れても大丈夫かと思います。かなまいしんは、どこかのプロとコールで入ったものを使うように書いてあったと思います。 でもふつうそんなにこんたみするもんではないと思いますけどね。手技そのたで原因やソースを見つけるよう努力された方がいいかと。そうじゃないと抗生物質つかっていても、頻度は下がるかもしれませんが、またこんたみするかもしれませんので。 で消毒ってなに、、、滅菌操作ではなさそうですが。

(無題) 削除/引用 No.2687-4 - 2013/12/25 (水) 08:55:31 - 波平 酵母と大腸菌よく使うけど，コンタミしたことないな。 ピペッターの除菌はやりましたか？ オートクレーブできるのならしてみたらいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2687-3 - 2013/12/25 (水) 06:49:47 - モモ インキュベーターは分けてますよね？

(無題) 削除/引用 No.2687-2 - 2013/12/24 (火) 17:40:54 - 弘法 大腸菌は乾燥に弱いので、それがコンタミするというのは手技上の問題のような気がします。 具体的にはどの程度のコンタミですか？プレートに１コロニー？数コロニー？一面に？ コンタミの原因が突き止められないなら、仕方がないので抗生物質を使うのもありかと思います。アンピシリンなどのバクテリア用の抗生物質なら酵母の生育に問題ないでしょう。

酵母の実験をしています 削除/引用 No.2687-1 - 2013/12/24 (火) 17:15:08 - sekieku 酵母の実験をしているのですが、コンタミをしてしまいます。 コンタミしたものを培養してみたら大腸菌が生えてきました。 共同実験者でカビと大腸菌を使っている人がいます。 ですがコンタミ対策で消毒はしっかり行っています。 コンタミ対策を何か教えていただけないでしょうか？ 三回に二回はコンタミをしてしまうので、抗生物質を入れなければいけないのか考えています。 酵母に影響をあたえないものがあれば教えていただけないでしょうか？

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