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(無題) 削除/引用 No.2824-3 - 2014/02/14 (金) 13:26:53 - おお まあねぇ、そう言う不確かなものでやるのはとはおもいますが、transformationしてすぐあっせーが出来るものならネガこん、ポジこんを持った上でやってみればいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2824-2 - 2014/02/14 (金) 12:59:30 - Harmonia ベクターを変更できないなら、野生型タンパク質のベクターでは救済するが、 変異型タンパク質とかGFP等関係無いタンパク質のベクターでは救済しない といった実験をすれば、発現云々を事前に言うは無いのでは？ もちろん発現が有るかどうか、ウエスタンブロットで見ると思いますが。

大腸菌での外来タンパク質発現 削除/引用 No.2824-1 - 2014/02/14 (金) 12:13:54 - 研究者X 大腸菌での外来タンパク質発現について質問させてください。 pET系のシステム (T7プロモーターを使用して外来タンパク質を発現させるシステム)の場合、通常BL21(DE3)株のようなT7 RNA ポリメラーゼを持っている株を使うと思います。 T7 RNA ポポリメラーゼを持たない株(例えば、DH5aやHB101)では T7プロモーターのleakynessは全く無いと考えてよいのでしょうか？ 現在、大腸菌の変異体のコンプリメンテーションの実験を計画しており、 この変異体は、T7 RNA ポリメラーゼを持ちません。 pET系のプラスミドでも少しリークするのであれば、 コンプリメンテーションができるのではと思っています。 よろしくお願いいたします。

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