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(無題) 削除/引用 No.3475-5 - 2014/10/23 (木) 09:54:59 - 小児科医師（ゆとり教育） 横からですが、774Rさんの説明はとても納得がいきました。

感謝 削除/引用 No.3475-4 - 2014/10/23 (木) 08:53:08 - 尾も白い ありがとうございます 早速　サンプルを調整しrunしてみます。

(無題) 削除/引用 No.3475-3 - 2014/10/22 (水) 17:45:51 - おお たとえばあるレーンが9ulほかが10ulそのとなりが11ulとかなら別に濃度をそろえないでもそんなに影響はないとおもう。容量が2倍とかかわるなら流れ方というかバンドのはばが各レーンでちがったりする可能性はあります。 定量や、微妙な変化をみたいなら(量だけでなくリン酸かなどでダブレットになるとか、大きさの変化など)、濃度を蛋白を調整したバッファーであわせてからサンプルバッファーを加えることをおすすめします。

(無題) 削除/引用 No.3475-2 - 2014/10/22 (水) 12:20:28 - 774R >1,についてはレーンごとの容量がそろうのでいいように思うのですが、PBSではタンパクの吸着がおこるとの指摘をWEBで拝見するのですが。ですのでDWで希釈するのでいいのでしょうか？ほかの希釈の方法があるのでしょうか？ RIPAで溶解してるなら濃度調整もRIPAでやるのが普通だと思いますが？なぜPBSだったり水なのでしょう？ 2.の方法はあまりオススメ出来ません。 容量がレーンごとに変わると操作ミスの原因になりますし、界面活性剤の入った溶液は完全にピペットの目盛り通りにレーンに入る保証がないからです。（チップの外側に付いてきてしまったり、内側に残ってしまう可能性がある。すべて同じ容量なら、こうしたズレも全てのレーンで同じ条件になると考える事が出来る。）

SDS-PAGE　サンプル調整 削除/引用 No.3475-1 - 2014/10/22 (水) 12:04:02 - 尾も白い いつも参考にさせていただいております。 初歩的な質問ですいません。 接着細胞をRIPA Bufferで溶解し、BCAにて蛋白濃度を測定しております。 SDS-PAGEに1レーンごと総蛋白量が１０ｕｇアプライしたいのですが。 2XSDSのサンプルバッファーを使用しています。 等量のタンパクをアプライするためのサンプルの調整について １,サンプルごと、20ug/10ulになるようにPBSもしくはDWで調整し、その10ulと2xSDSを10ulと混ぜたのちボイルし、10ulしたほうがいいのか？ ２,レーンごとアプライする容量はことなるがサンプルの総蛋白量が10ugになるようにたのでいいのか？ 1,についてはレーンごとの容量がそろうのでいいように思うのですが、PBSではタンパクの吸着がおこるとの指摘をWEBで拝見するのですが。ですのでDWで希釈するのでいいのでしょうか？ほかの希釈の方法があるのでしょうか？ ２、についてはレーンがゆがんだりしませんか？タンパク量がそろっていればだいじょうぶでしょうか。 一般的にどうやっていらっしゃるかおしえてください。

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