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DNA抽出について トピック削除
No.3555-TOPIC - 2014/11/17 (月) 13:41:09 - akore
初めてトピックを立てさせていただきました。

私が所属している研究室ではDNA・RAN・タンパク抽出にTRIzolを使用しています。

TRIzolに記載されているプロトコール通りに行っているのですが、DNAの純度が低いです。

TRIzolを使ったDNA抽出では純度を上げる事ができないのでしょうか?


初歩的な事ですみませんが、お願いします。
 
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No.3555-7 - 2014/11/18 (火) 10:32:11 - akore
>[Re:6] おおさんは
> 尿素で溶かしたあとは、塩を入れてからアルコールで沈殿させます。塩を入れるのをお忘れなく。150-200mM NaClとか、300M Na acetateとか。

わかりました

ありがとうございました!

(無題) 削除/引用
No.3555-6 - 2014/11/18 (火) 00:43:00 - おお
尿素で溶かしたあとは、塩を入れてからアルコールで沈殿させます。塩を入れるのをお忘れなく。150-200mM NaClとか、300M Na acetateとか。

(無題) 削除/引用
No.3555-5 - 2014/11/17 (月) 16:41:45 - akore
>[Re:4] おおさん
>
> プロダクトマニュアルにかいてあるようにsodium citrate/ ethanol solutionで洗っているのでしょうか。
>
> そのご75% ethanolで洗い、溶かす手はずになっているようですね。
>
> 75% ethanolをいれず、6Mぐらいの尿素でDNAを溶かして、それをエタチンするとかなり違ってくると思います。この操作だと解かすときにNaOHは必要なさそうです。
>
>
> じっさいにtrizolでは尿素を使ったことがないですが、DNAなどをきれいにするなどの目的でよく尿素を私はつかいます。


はい。マニュアルにあるように洗っています。
75% ethanolを入れず尿素でDNAを溶かす方法もあるのですね。

一度尿素で溶かす操作を行ってみます。
ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.3555-4 - 2014/11/17 (月) 15:23:41 - おお

プロダクトマニュアルにかいてあるようにsodium citrate/ ethanol solutionで洗っているのでしょうか。

そのご75% ethanolで洗い、溶かす手はずになっているようですね。

75% ethanolをいれず、6Mぐらいの尿素でDNAを溶かして、それをエタチンするとかなり違ってくると思います。この操作だと解かすときにNaOHは必要なさそうです。


じっさいにtrizolでは尿素を使ったことがないですが、DNAなどをきれいにするなどの目的でよく尿素を私はつかいます。

(無題) 削除/引用
No.3555-3 - 2014/11/17 (月) 14:12:58 - akore
>[Re:2] おおさんは書きました :
> さらにもうワンステップせいせいすればいいんじゃないでしょうか。

そうですよね・・・・。やはりそれが一番ですよね。
他の方法等も検討してみようかと考えてはいるのですが。

(無題) 削除/引用
No.3555-2 - 2014/11/17 (月) 14:03:49 - おお
さらにもうワンステップせいせいすればいいんじゃないでしょうか。

DNA抽出について 削除/引用
No.3555-1 - 2014/11/17 (月) 13:41:09 - akore
初めてトピックを立てさせていただきました。

私が所属している研究室ではDNA・RAN・タンパク抽出にTRIzolを使用しています。

TRIzolに記載されているプロトコール通りに行っているのですが、DNAの純度が低いです。

TRIzolを使ったDNA抽出では純度を上げる事ができないのでしょうか?


初歩的な事ですみませんが、お願いします。

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