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(無題) 削除/引用 No.3561-5 - 2014/11/19 (水) 00:39:06 - おお ギムザ(メチレンブルー)とかでもいいんじゃないか。

コメントありがとうございます。さらにご意見をお願いします。 削除/引用 No.3561-4 - 2014/11/18 (火) 23:29:46 - KK 調べられるプロトコールについては大体見て 大筋はわかっておりますが transwellでmigrationした細胞を染めたことがないので 普通の細胞染色と同じように染めてよいのか、詳細がわかりません。 今のところ、以前やった細胞染色のプロトコールを参考に 以下のプロトコールを考えておりますが こちらの染色で問題ないでしょうか？ assay終了後、新しい24wellプレートにPBSをいれて そこにinsertをうつしてwash（2回、各5分） その後、４%PFAで固定（固定にかかる時間がどのくらいが良いのかわからず、困惑。10ー15分程度でやってみよかと思ってます。） 上層の細胞を綿棒で除去 wash（2回） 0.05(?)%TritonX-100 処置　？？分（10ー20分くらい？） wash（2回） DAPI(100mg/mL)　5分？？？ wash（2回） 蛍光顕微鏡で観察（ランダムに5視野観察予定） ご意見を宜しくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.3561-2 - 2014/11/18 (火) 17:35:14 - k Transwell Assay Protocolで調べればいくらでも見つかりますよ

Transwellでmigrationした細胞の染色方法について 削除/引用 No.3561-1 - 2014/11/18 (火) 17:17:01 - KK Transwellを用いた細胞遊走試験を始めて実施する者です。 これまで細胞染色の経験もほとんどありません。 使用しているTranswellはコーニングの24well、ポリカーボネート製、ポアサイズ8μmです。 播種細胞はヒト肺動脈平滑筋を予定しております。 手持ちの細胞染色試薬がDAPIぐらいしかないので 4%　PFAで固定して、DAPIで染めて、核の数をカウントしようかと思うのですが どのような手順で実施したらよいのか詳細がわかりません。 インキュベーション時間、washの時間、回数、上層の細胞の除去のタイミングや方法について、ご教授願いたく存じます。 宜しくお願い致します。

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