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(無題) 削除/引用 No.3744-3 - 2015/01/14 (水) 15:30:15 - BD 早速の返答ありがとうございます pH 8.0のバッファー有りますので早速試してみようと思います。 現在、培養液に終濃度 100 mM程度になるようにバッファーを添加してpHを調製しております。 この方法で問題無いものでしょうか？ ご指摘頂ければ幸いです。

(無題) 削除/引用 No.3744-2 - 2015/01/14 (水) 14:59:22 - おお 7でも低いかなぁ。。。培養液ということなのでアミノ酸など結合を阻害するものがいろいろありそうな気がします。pH8あたりのバッファーで透析してみてはどうでしょうか。

His-tagタンパク質の精製 削除/引用 No.3744-1 - 2015/01/14 (水) 14:24:51 - BD His-tagのタンパク質を精製している学生です。 先輩の行っていた実験では十分に回収できていたようなのですが、回収出来るタンパク質量が非常に少ないです。 手法としては 酵母の菌体外に目的タンパク質を生産させます（培養液に目的タンパク質が生産される）。 培養液の全量は100 mL程度です。カラムボリュームは5 mLのものに全量を流して吸着させます。 洗浄は20 mL, 溶出15 mLでタンパク質の精製を行いました。 溶出したタンパク質 (15 mL)と培養液 (100 mL)をSDS-PAGEをして比較してみると、溶出したタンパク質の方が薄く、ほとんどが吸着せず、フロースルーに存在していることがわかりました。 吸着しない理由として中性付近でないとHis-tagとカラムが結合しないとのことでしたので、培養液 (pH 5.5)をリン酸バッファーで pH 7.0に調製しましたが特に変わりませんでした。 先輩のノートには詳細が記されておらず、困っております。 どなたか、ご存知の方、ご教授下さい。

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