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(無題) 削除/引用 No.3935-4 - 2015/03/11 (水) 16:43:55 - おお ＞アミノ酸（セリン・トレオニン等）にリン酸化修飾を行う試薬・方法 E、Dに変換することでリン酸化された状態と似たタンパクになる可能性があります。 そのタンパクをリン酸化するキナーゼを共発現させてやる

(無題) 削除/引用 No.3935-3 - 2015/03/11 (水) 16:40:27 - おお MAPKのカスケードは酵母のカスケードの一部をつぶしそれをレスキューする哺乳動物のMAPKカスケードのキナーゼがいろいろクローニングされました。 リン酸化する酵素に似た遺伝子を持つならリン酸化される可能性はあります。

(無題) 削除/引用 No.3935-2 - 2015/03/11 (水) 15:21:41 - 中年 酵母に該当するリン酸化酵素のオルソログが存在すれば、同じ残基でリン酸化されることはあり得ます。 リン酸化されない場合には、該当するリン酸化酵素を酵母で共発現することが有効である可能性があります（three-hybrid）。また、リン酸化される残基を酸性アミノ酸に置換した変異体がphospho-mimicとして挙動することが本来の細胞において確認できるなら、それをbaitとして使う方法もあります。

遺伝子・タンパク質のリン酸化について 削除/引用 No.3935-1 - 2015/03/11 (水) 14:38:20 - 誠 いつもありがとうございます。以前ＰＣＲやベクター構築の件でアドバイスを頂き、無事構築に至りました。 さて、今回の質問はリン酸化についてです。 構築したベクターにはタンパク質をコードするＯＲＦが組み込まれているのですが、通常は生体内（細胞内）でトレオニンやセリンのリン酸化修飾を受けて機能しているタンパク質です。 今回、酵母に形質転換しtwo-hybridでの実験を進める予定なのですが、酵母内でリン酸化修飾は行われるのでしょうか？（私は行われないと考えております） 行われないとすれば、宿主内で発現させたタンパク質の特定のアミノ酸（セリン・トレオニン等）にリン酸化修飾を行う試薬・方法をご存知の方はいらっしゃいませんか？ また知恵をお貸しください。よろしくお願いいたします。

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