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(無題) 削除/引用 No.4696-14 - 2015/12/26 (土) 09:34:24 - 中年 タンパク質でその濃度ならUVの吸光で検出できますよね。

(無題) 削除/引用 No.4696-13 - 2015/12/26 (土) 00:25:08 - くぁwせdrftgyふじこlp BCA法は還元作用のある物質（DTTだとかアスコルビン酸とかそういう系のやつ）は反応して疑陽性示すし、それ以外でもそういうのはあるとおもうので、蛋白質が混入してるは即断できないかもしれないとおもう。、仮に蛋白質だったとしたら、BCAでdetectionできるくらいだとそれなりの量を含んでるとおもうので、なんかの間違えでちょっと入ってしまったみたいなのとは違うような気がする。 高いものなら返品して交換してもらえばいいとおもうけど、まあPBSなら違うメーカーから買い直せば。 新品でそういうことが起きたのか、それとも開封して何度か使っていたものがそうなのかというのもあるし。

(無題) 削除/引用 No.4696-12 - 2015/12/25 (金) 15:07:30 - おお 培養用のPBSも売ってますのでそういうのをつかうといいかと思いますが、免疫染色用は組織洗浄用でもいいでしょうけど、、、そんなになんか入ってたらいやだねぇ。。。なんだろう。。。

(無題) 削除/引用 No.4696-11 - 2015/12/25 (金) 12:19:42 - 気になったところ 組織洗浄用のPBSを細胞培養に使っているのですか？ 組織洗浄用PBSだとマイコプラズマやエンドトキシンの有無はさすがに保証していないと思いますけど、、、、 ワコーの組織洗浄用PBSだと0.45マイクロのフィルターを通しているだけみたいですが、、、大丈夫？

(無題) 削除/引用 No.4696-10 - 2015/12/25 (金) 12:04:03 - 生体材料研究者みならい みなさま 助言くださりありがとうございます． ＞＞本当にPBSにタンパク質が混入していたか ＞＞実験操作中にコンタミしたものではないのか 自分たちではPBSにタンパク質が入っていたと考えています． 購入して未開封の瓶を新しく開封し， 滅菌されているpipetteで取り出してμBCAかけただけで発色したので． 以前購入した同メーカーの製品では発色しませんでした． 発色の度合いとしてはかなり強く，肉眼でもはっきりと視認でき， 発色の度合いから判断するに20μg/ml程度入っていたように見えました． ＞＞PVDFのフィルターを通してみては？ ありがとうございます．考えてみます． いまは別のメーカーから購入することを検討しています．

(無題) 削除/引用 No.4696-9 - 2015/12/25 (金) 10:39:55 - おお なんなら、買ってきた新品を一部残して0.2uのPVDFを素材として採用しているフィルターをかけて前後で比較してみてもいいかも。

(無題) 削除/引用 No.4696-8 - 2015/12/25 (金) 10:35:10 - み >[Re:1] 生体材料研究者みならいさんは書きました : > そのPBSを用いてμBCA assayをしていたところ、 > どうもPBSにタンパク質が混ざり込んでいるようでした． BCA assayで若干発色したのでしょうけれど蛋白が本当に存在したのか疑わしい。blankと比べて吸光度がゼロにならなかった程度じゃないですか？ > > メーカーに問い合わせてみたところ、 > このPBSは不純物にタンパク質が含まれていないことまでは、保証していないそうなので… 特別な処理や含有を否定するチェックをわざわざしていないなら、メーカーはそう答えるしかないでしょう。だからと言って蛋白が含まれている確率は無いに等しいのでは？

(無題) 削除/引用 No.4696-7 - 2015/12/25 (金) 10:29:18 - おお RNAようにフィルターされたものだったら、PVDFでフィルターされたものもあるのでそういうものだったらかなり蛋白は吸着されて除外されているはず。

(無題) 削除/引用 No.4696-6 - 2015/12/25 (金) 09:51:17 - 独り言 それって、分子生物学用とか細胞培養用とかで売られている、グレード高いもので起こっているのでしょうか？ そうであれば、困り者ですね。

(無題) 削除/引用 No.4696-5 - 2015/12/25 (金) 09:40:11 - おお 調べた PBSが使っている間にコンタミしたり、それが原因でバクテリアなどが増えている可能性は除外できますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4696-4 - 2015/12/25 (金) 09:38:35 - おお 感度高いから操作中に入ったりしてるかもしれないし、、、 メーカーも無い事を証明するのはできないから曖昧な回答になるかとおもえます。

本当に入っている？ 削除/引用 No.4696-3 - 2015/12/25 (金) 09:22:09 - ふみ 単にBCAアッセイのバックグラウンドということはないでしょうか？ 水や他のバッファでも同じぐらいの低いレベルで検出されませんか？ あるいは、過去に使っていたPBSのロットでは非検出でしたか？

(無題) 削除/引用 No.4696-2 - 2015/12/25 (金) 01:48:29 - おお どこのどんなproductかわかりませんのでそれが使えるのかどうかということは答えられませんけど、不純物なら入ってないほうがいい訳だし、他のメーカーに換えるとかしたらどうでしょうか。どんだけ蛋白が入ってるかちょっと興味がありますけど。BCAだとナノグラム/マイクロリッターぐらいでも引っかかりますよね。バックグランドの変動がPBSであるかどうかわかりませんけど。

市販PBSに謎のタンパク質が入っていた 削除/引用 No.4696-1 - 2015/12/25 (金) 00:45:28 - 生体材料研究者みならい お世話になります 自分は生体材料系の研究をしており、細胞培養をしています． 細胞培養等に用いるPBSは不純物としてのタンパク質は含んでいても良いのでしょうか． 細胞培養の際はみなさんPBSを使われることが多いかと思います． （例：トリプシン処理の前のフラスコ、シャーレの洗浄、免疫染色の際の試料の洗浄、μBCA assay） 自分の研究室では、純水製造機がないこともありPBSについては、すでに調製済みのものを購入して使用しています. そのPBSを用いてμBCA assayをしていたところ、 どうもPBSにタンパク質が混ざり込んでいるようでした． メーカーに問い合わせてみたところ、 このPBSは不純物にタンパク質が含まれていないことまでは、保証していないそうなので… そのPBSは組織洗浄用と銘打っていましたが… これでいいのかと気になり質問させていただいた次第です． 正直上記の例であげた実験では、 変なタンパク質が混ざり込んでいてはまずい気がします ご教示いただければ幸いです

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