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(無題) 削除/引用 No.6892-2 - 2018/05/03 (木) 08:23:50 - mon まあ行ってみないと判りませんが、増感はしないので1000倍希釈を試してみるかな。 発光試薬の性能を上げれば5000倍希釈でも行けるかも。 ただ、製品によっては100~500倍希釈に下げる必要がある。 理由は、HRP標識は通常アミノ基を標的にするが、Fab部分とくにCDR（に近い）部位に標識されると抗原結合に影響が出るので、抗原に結合可能な抗体一分子あたりの平均HRP数が減るからです。

HRP直接標識プライマリ抗体（ウエスタン） 削除/引用 No.6892-1 - 2018/05/03 (木) 08:05:21 - HRP Far western blottingを行なっています。 組換えタンパク質にはmycタグが付いています。これを一次としてPVDF膜と反応後、mouse anti-mycを二次として反応させ、最後にHRP-抗マウス抗体をあてています。 非常に工程が長いので、上司を説得してHRP-mouse anti-mycを買って貰いました。 サンタクルズ社のものです。 ただいつもの一次抗体の時のように1000倍希釈で使ってもいいのでしょうか？ それとも5000-10000倍くらい二次抗体の時の要領で希釈するべきでしょうか？

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