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(無題) 削除/引用 No.6901-5 - 2018/05/11 (金) 17:13:11 - mi 皆さん回答ありがとうございます。 お返事が遅れてすいません。 制限酵素を変えていろいろ試してみたところ、予想通りのバンドが見られました。シーケンサーの調子が悪く、本当に結果がわかるのはまだ先ですが…＞＜ 皆さんのおかげで次の作業に進むことができます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.6901-4 - 2018/05/07 (月) 17:59:42 - AA 4分の4でバンドパターンが同じなら多分うまく行っていますね。 もちろん経験則なので確認は必須ですが、シークエンスができないなら 目的の配列の内部にサイトのある制限酵素で処理して、 期待される長さの断片が出来るかで確認すると、 だいたいあってそうかどうか判定できますよ。

(無題) 削除/引用 No.6901-3 - 2018/05/07 (月) 17:00:49 - おお 高い塩濃度のバッファーを使う制限酵素処理をした場合、バッファーの塩濃度によって移動度が遅くなる場合があります。プラスミドバックボーンのサイズも上がってませんか？

(無題) 削除/引用 No.6901-2 - 2018/05/07 (月) 16:08:57 - mon GC（AT)の偏り、bent DNA領域等で泳動度が合わないときもあります。 インサート両側・内部をさらに切断してどの断片の泳動度がおかしいか調べてみては。

電気泳動で予想より大きいバンドがみえる 削除/引用 No.6901-1 - 2018/05/07 (月) 15:47:39 - mi pGEM-TEasyベクター(3015bp)にインサート(約2000bp)を組み込んだプラスミドを制限酵素で一か所切断し(直鎖上にし)、0.8％agarで泳動しました。 5000bp前後のバンドを予想していましたが、実際は6000bp前後にバンドが一本現れるという結果でした。 pGEMにインサートをトランスフォーメーションしたあと白コロニーを4つとってきてプラスミド抽出してそれぞれに制限酵素処理したのですが、4つすべてで予想より大きいバンドが出ています。4つの間でバンドの見た目に差はなく、どれも6000bp前後のバンドです。 切れすぎて複数バンドが見える、切れずに環状のまま流れて予想より小さい位置に見える、等ならまだしも、予想より大きいバンドがみえる意味がよくわかりません。 シークエンスで確認する予定ですが、機械の予約がいっぱいでなかなか先に進めないので質問いたしました。 こういった現象は起こることなのでしょうか？またその原因はなんなのでしょうか？ 研究を始めたばかりの学生で、意味の分からないことを言っているかもしれませんがぜひ回答をお願いします。

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