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(無題) 削除/引用 No.7293-6 - 2018/10/07 (日) 15:55:11 - チェリー 皆様 ありがとうございます。 やはり、ボイルなしで試してみるのが良いのかもしれませんね。 下記は市販されている　Recombinant mCherryのデータシートです。 https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/STA-202-recombinant-rfp.pdf こちらにも熱でバンドが切れることが記載されています。 業界では結構有名なのでしょうか。 mCherryタグを使うときは気を付けたほうが良いと思いました。

(無題) 削除/引用 No.7293-5 - 2018/10/07 (日) 15:34:37 - おお あ、その前に情報ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.7293-4 - 2018/10/07 (日) 15:33:11 - おお 尿素をつかうとボイルせずにかなり編成させることができます。６M尿素、１％SDS、１０mM DTT、BPBで懸濁して室温で５分ぐらい置くとタンパク量がかなりあるとか相当溶けにくいもの（線維化したコラーゲンとか）とかでなければSDSPAGEにローディングできるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.7293-3 - 2018/10/07 (日) 13:26:48 - 小言幸兵衛 プロテアーゼによる分解が問題にならない系なら、ボイルしないで37℃あたりでSDS化してみれば？

(無題) 削除/引用 No.7293-2 - 2018/10/07 (日) 11:45:26 - チェリー ＞そんな時に、「mCherryが切れる」という記事を目にしました。 失礼しました。 アドレスを記載し忘れました。 http://tenure5.vbl.okayama-u.ac.jp/HM_blog/?p=3134 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16594705

mCherry抗体のWB解析で困っています。バンドが切れてしまう。 削除/引用 No.7293-1 - 2018/10/07 (日) 11:44:14 - チェリー お世話になります。 ヒト培養癌細胞に タンパクX-mCherry と、いうプラスミドをトランスフェクションして安定発現株を樹立しました。 共焦点レーザー顕微鏡での解析では、 予想されるオルガネラにmCherryが局在しており、上手く動いていると考えられました。 今回、この細胞をウエスタン解析し、 mCherryの抗体で検出してみたのですが、予想される分子量のバンドが微弱で 代わりに30kDa付近に強いバンドが出てしまいました。 タンパクX : 20 Kda mCherry : 30 kDa ですので、本来ですと、mCherryの抗体で 50kDaが検出されると思います。 それがなぜか、30kDa付近に強いバンドが出ています。 タンパクXの抗体は市販されていませんでした。 そんな時に、「mCherryが切れる」という記事を目にしました。 mCherryはボイルにより切れてしまうそうです。 mCherry融合タンパクはウエスタン解析することができないのでしょうか。 もしご存知でしたら教えていただけましたら幸いです。 何卒よろしくお願いします。

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