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(無題) 削除/引用 No.7450-2 - 2018/12/03 (月) 09:53:19 - よっしー 私はいつも無固定の腸管を包埋，凍結，切片作製し，切片をアセトンやPFA，メタノールなどで用途に合わせて固定していました． 固定したものより，きれいな切片が切れて，IHCのバックも上がりにくく問題になったことは有りませんでした．WGAは染めたことがありませんが・・・

マウス小腸の凍結切片作製のコツ 削除/引用 No.7450-1 - 2018/11/30 (金) 23:11:13 - 年齢だけはベテランの実験助手 はじめまして。マウスの実験を行っています。 マウスの小腸の凍結切片で免疫染色を行っています。その際にWGAで細胞膜も染めたりするのですが、腸腺の円の中心部にWGAがダマになったように染色されてしまいます。 そこ以外にも組織のあちらこちらで空洞になってしまっているのか、ダマになって染色されてしまいます。どこかおかしいのでしょうか。 下記のような手順で実験を行っています。 どなたかアドバイスをいただければ幸いです。 よろしくお願い申し上げます。 �@4%PFAで灌流固定してから小腸摘出 �A4%PFAで浸透固定。4℃でovernight �B10%スクロース、20%スクロースと段階的に上げ、4℃でovernight �COCTコンパウンドで包埋して、-80℃で保存 �Dクライオスタットで切片作成

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