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(無題) 削除/引用 No.7885-3 - 2019/05/13 (月) 13:24:06 - AP 本当にブロッキングの問題なのか確証はありますか？ 適当なコントロールをおかないと判断つかないと思いますが、 ・抗体なし（内在性PO活性の検証） ・一次抗体なし二次抗体のみ（二次抗体の交差性の検証） くらいはやってるんでしょうか？

IHCの条件がよくわかりませんが 削除/引用 No.7885-2 - 2019/05/13 (月) 12:11:11 - かんちゃん 1次抗体がmouse IgG, anti-XX antibodyで、2次抗体がanti-mouse IgG-HRPでしょうか。そうであれば、以下をおすすめします。 1) Vector社のmouse on mouseキットを使う 2) 1次抗体にHRP標識（抗原が多いことが予想される場合） 3) 1次抗体をビオチン化、検出系としてstreptavidin-HRPを使う（バックは高いままかも） 1次抗体がrabbit IgGなどであれば、2次抗体（anti rabbit IgG-HRP）をさらに希釈してみる、など免染のステップ最適化が必要かと思われます。 切片はパラでしょうか、それとも凍結切片でしょうか。　凍結切片の方が抗体反応が進みやすく、パラ切片よりも低濃度の抗体を使用するイメージがあります。 ブロッキングは、いろいろかえても「おおっ〜」というほど変化を得たことがありませんが、推奨濃度で推奨時間行われていますよね。

ブロッキングバッファー 削除/引用 No.7885-1 - 2019/05/12 (日) 07:19:40 - フーフー マウスの大腸癌組織を還流固定後、DABによる抗体染色を行っております。組織全体が濃染してしまっていてなかなか改善しない状況です。ブロッキングバッファーは各社からいろいろと出ているのですが、会社によって違いはありますか？非特異的なシグナルが出ているため、ブロッキングの時間を変えたり工夫しているのですが、なかなか改善を認めません。抗体はWesternではsingle bandであることは確認しました。

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