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(無題) 削除/引用 No.8590-6 - 2020/01/25 (土) 13:33:54 - にもにも 先生方 コメント、ご教示、本当にありがとうございました。 発現ベクターはタンパク質発現もmiRNA発現もともに CMV-MCS-SV40polyA という構成になっており、違いが判りませんでした。 AP様、asan様のコメントが大変勉強になりました。 また実例をご教示くださいまして、大変心強くなりました。 早速勉強いたします。 指導教員と実験方針を議論いたします。 本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.8590-5 - 2020/01/24 (金) 11:05:53 - asan microRNAはpolI系で発現しますよ。普通のmRNAと同じですから。 たとえば　こんな感じとか https://www.nacalai.co.jp/Fount/origene_microrna.html こんな感じでEGFPのtranscriptと一緒に発現させたりもされてます https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211124713006876 単にプロセシングによってmiRNAとして機能するだけの話。 pol3系より効率がいい場合もあって最近はshRNAよりもmiRNAベースのKDとかも使われてます。

(無題) 削除/引用 No.8590-4 - 2020/01/24 (金) 02:52:52 - おお > プラスミドDNAでmicroRNA過剰発現を行うために、市販ベクターをいろいろと調べました。 > > 蛍光タンパク質で遺伝子導入を確認できるベクターなどが「microRNA発現ベクター」として販売されています。 > そもそもmicroRNAは、通常のタンパク質発現ベクター（CMVプロモーター、EF1aプロモーター）では発現できないのでしょうか？ > というか本当に調べたのでしょうか、、、 www.takarabio.com/products/gene-function/mammalian-expression-plasmids/microrna-expression www.origene.com/catalog/vectors/microrna-vector/pcmvmir/pcmvmir-microrna-expression-vector https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168365910009636?via%3Dihub またEndoのmiRNAはどのように発現しますか？

(無題) 削除/引用 No.8590-3 - 2020/01/23 (木) 22:16:42 - おお >「microRNA発現ベクター」と「通常のタンパク質発現ベクター」を比べてみましても、大差があるように思えません。 何をもって？

(無題) 削除/引用 No.8590-2 - 2020/01/23 (木) 22:02:17 - AP CMV プロモータなどRNA Pol IIで転写するよりも、RNA pol IIIで転写されるプロモータの方が適しているということだと理解しています。pol IIIはpol IIと違って、定まった転写集結配列配列があるので決まった長さの短いRNAを転写させるのに適しています。

microRNA過剰発現 削除/引用 No.8590-1 - 2020/01/23 (木) 20:51:26 - にもにも いつも勉強させて頂いております。 研究で培養細胞にはじめてmicroRNA過剰発現を行います。 どうしてもわからないことがありますので、ご存知の方がいらっしゃったらご教示ください。 プラスミドDNAでmicroRNA過剰発現を行うために、市販ベクターをいろいろと調べました。 蛍光タンパク質で遺伝子導入を確認できるベクターなどが「microRNA発現ベクター」として販売されています。 そもそもmicroRNAは、通常のタンパク質発現ベクター（CMVプロモーター、EF1aプロモーター）では発現できないのでしょうか？ 「microRNA発現ベクター」と「通常のタンパク質発現ベクター」を比べてみましても、大差があるように思えません。 研究室の資金のこともあり可能なら「microRNA発現ベクター」を購入せず、手元にある通常のタンパク質発現ベクターで実験を進めるよう、指示を受けました。 ご存知の方がいらっしゃいましたら、 どうぞよろしくお願い申し上げます。

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