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(無題) 削除/引用 No.8834-6 - 2020/05/13 (水) 02:38:18 - ぶんちゃん 1様 実は研究室の-80℃あった古い血清で、凍結融解されていたのか、冷凍までの保存輸送方法は不明です。 使用時に溶かしてみると、一様に透明で、白濁などはありません。 もしかしたら血清サンプルそのものが劣化しているのかもしれませんね… ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.8834-5 - 2020/05/11 (月) 17:49:27 - 1 ヒト血清は手元に来るまでどのような保管状況かは聞いてますか。もともと患者さんの検査に使用する目的で血し保管していたものと思うので、少量分注して-80C保存とかしないかもしれないので、凍結融解を何回かしてるかもしれない（それでも検査項目の多くは測定に問題ないと思うし）。前に臨床検体いただいたことあるけど、フィブリンの塊があったり、沈殿物があったりする検体がいくつかあった。このように保存して欲しいとか現場の人に説明してあらかじめ頼んでおいた方がいいと思う。

(無題) 削除/引用 No.8834-4 - 2020/05/10 (日) 20:25:13 - ぶんちゃん おお様 HEK発現した抗原タンパク質は市販品で、精製済みと書いてありました。 1様 個体差がありました。まどウェスタンはしておりません。 確かに面白いと思っております。 少し気になるのは、HEK発現の抗原を使った研究の論文はかなり見かけますが、その中でこのようなクロス？を起こしているものがあまりないこと、言及されていないこと、です。恣意的に取り除かれていることもあるのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.8834-3 - 2020/05/10 (日) 02:30:48 - 1 人はいろんな抗体できてるからね、あたりまえだけど同じ飼育環境で微生物管理された実験動物の実験データみたいにきれいな結果じゃないこと多いし。個体差も大きくてエラーバー半端ないこともよくあるので、ヒト検体で実験するときは、とくに免疫の実験するときは頭きりかえたほうがいい。個体差なくどの検体でも陽性ですか。western blottingでもみてみた？　分子量情報が得られるし、面白そうなら同定してみたらそれはそれで新しい発見につながるかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.8834-2 - 2020/05/09 (土) 17:13:11 - おお 使った抗原は精製してないのですか？培養には血清は入れてますか？

HEK293細胞で発現させた抗原への交差反応 削除/引用 No.8834-1 - 2020/05/09 (土) 15:53:09 - ぶんちゃん お世話になります。 HEK293で発現させた組換え蛋白質を抗原としてELISAを組んでおりますが、 陽性になってはいけない血清サンプルで陽性ととれる反応が多発してしまい、 HEK293に対する交差反応を疑っております。 HEK293細胞の培養上清を凍結融解を繰り返して超音波処理をし、 これを抗原液、擬陽性血清を1次抗体としてELISAを行ったところ、同様に陽性状態になりました。 HEK293細胞はアデノウイルス5のE1遺伝子をも発現しているようですが、これに対して反応する抗体がヒト血清中に含まれるのは、常識でしょうか? あまりこれについて言及されている文献を見たことがなかったので、何かご存じの方がいらっしゃればご教授いただけますと幸いです。 実験について 抗原：HEK293発現組換え蛋白質 1次抗体：ヒト血清(非動化していません) 2次抗体：goat anti-human IgG Fc よろしくお願いします。

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