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qPCRで複数遺伝子を１枚のプレートで同時測定できる？ トピック削除
No.9846-TOPIC - 2021/08/08 (日) 14:12:27 - 生命系修士課程一年生
余りにも基礎的すぎて申し訳ないのですが，私らが研究室の一期生であって相談する先輩がいないので，ここで相談させていただきます．

リアルタイムq-PCR（サイバーグリーン法）を96well plateを用いてやるときに，異なるprimer set (GAPDHと目的遺伝子-A, -B, -C)を同時に測定してもよろしいのでしょうか？
なぜかサンプル次第でサチュレーションを起こすRn値が異なっているのです．
なので，機械　（Bioradを使っています）で計算されたCt値というのは，どの遺伝子を参考に設定しているのか心配になってきました．

もちろん8連チューブで個別の遺伝子ごとにやるのがベストだと思うのですが，手間を考えれば96 well　plate一枚でやりたいというのが本音です．

また，同じ96 well　plateを２回使ったりしたことあるヒトはいらっしゃいますか？
例えば，Plateの半分だけ使ってGAPDHを測定し，その後残り半分のウェルをつかって目的遺伝子を測定することって可能なのでしょうか？

お忙しいところすみませんが，皆様のご意見をきかせてください．
よろしくお願いします．
　
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No.9846-7 - 2021/08/12 (木) 02:36:04 - おお
>[Re:5] 生命系修士課程一年生さんは書きました :
> みなさまありがとうございます．
>
> 複数遺伝子に関する測定を１枚のプレートで同時に実施できるとのことで理解しました．
> 今後も分からないことがありましたら，是非みなさんにご相談させていただきます．

Rnのとり方と本当に理解できたのだろうか、、、もしみんなができるというから、できると理解したとか言うなら不安を覚えるし理解したとは言えないし、、、

(無題) 削除/引用
No.9846-6 - 2021/08/10 (火) 14:13:58 - あの
次の質問の意味が、もし
　一度使ったプレートを冷めたあとにもう一度機械にのせる、

という意味だったら、プレートの変形の理由から、推奨するメーカーは無いと思うし、当方でも絶対にしないです：

”同じ96 well　plateを２回使ったりしたことあるヒトはいらっしゃいますか？
例えば，Plateの半分だけ使ってGAPDHを測定し，その後残り半分のウェルをつかって目的遺伝子を測定することって可能なのでしょうか？”


ふつうは、ウェルごとに温度を変えて、同時に増幅反応します。

(無題) 削除/引用
No.9846-5 - 2021/08/10 (火) 14:07:46 - 生命系修士課程一年生
みなさまありがとうございます．

複数遺伝子に関する測定を１枚のプレートで同時に実施できるとのことで理解しました．
今後も分からないことがありましたら，是非みなさんにご相談させていただきます．

(無題) 削除/引用
No.9846-4 - 2021/08/10 (火) 05:19:01 - おお
>機械　（Bioradを使っています）で計算されたCt値というのは，どの遺伝子を参考に設定しているのか心配になってきました．

そんな計算方法がありますか？

(無題) 削除/引用
No.9846-3 - 2021/08/08 (日) 20:08:23 - TT
普通に可能です。実際、いろいろなパスウェイに関係のある異なる一群の遺伝子をqPCRで１枚のプレートで同時に調べる発現解析アレイもいくつかのメーカーから販売されてますし、メーカーによってはカスタムで希望の遺伝子セットでプレートを作ってもらうことも可能です。自分でするのはcDNAとマスターミックス入れれてqPCR装置に入れればばいいだけなので簡単なような気がします。

(無題) 削除/引用
No.9846-2 - 2021/08/08 (日) 14:37:28 - あかね
できます

qPCRで複数遺伝子を１枚のプレートで同時測定できる？ 削除/引用
No.9846-1 - 2021/08/08 (日) 14:12:27 - 生命系修士課程一年生
余りにも基礎的すぎて申し訳ないのですが，私らが研究室の一期生であって相談する先輩がいないので，ここで相談させていただきます．

リアルタイムq-PCR（サイバーグリーン法）を96well plateを用いてやるときに，異なるprimer set (GAPDHと目的遺伝子-A, -B, -C)を同時に測定してもよろしいのでしょうか？
なぜかサンプル次第でサチュレーションを起こすRn値が異なっているのです．
なので，機械　（Bioradを使っています）で計算されたCt値というのは，どの遺伝子を参考に設定しているのか心配になってきました．

もちろん8連チューブで個別の遺伝子ごとにやるのがベストだと思うのですが，手間を考えれば96 well　plate一枚でやりたいというのが本音です．

また，同じ96 well　plateを２回使ったりしたことあるヒトはいらっしゃいますか？
例えば，Plateの半分だけ使ってGAPDHを測定し，その後残り半分のウェルをつかって目的遺伝子を測定することって可能なのでしょうか？

お忙しいところすみませんが，皆様のご意見をきかせてください．
よろしくお願いします．
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