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(無題) 削除/引用 No.9882-5 - 2021/09/01 (水) 09:02:22 - そも プラスチックディッシュで同じ事をした場合は剥がれないのでしょうか？ ポリマー素材のチャンバースライドもあるので、材質を変更するのも方法の1つかと思います。 ttps://ibidi.com/chambered-coverslips/251--slide-8-well-high.html

(無題) 削除/引用 No.9882-4 - 2021/08/31 (火) 08:17:18 - qq DMEM＋FCSで洗っても剥がれない？ FCSを除去したいのであれば、DMEM（-FCS）で洗うのはどうだろうか？ PBS-に近いものであれば、PBS(＋MgCa)で洗うのがいいんじゃない？ いずれも温めてある？

(無題) 削除/引用 No.9882-3 - 2021/08/30 (月) 21:04:15 - ema >1xPBSをp1000ピペットを用いて洗浄するたびに細胞が丸くなって少なくなります。 これが最後のステップで蛍光染色をしたいだけなら、いっそはがしてエッペン等で蛍光染色して再播種して貼り付ける、というのはだめなのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.9882-2 - 2021/08/27 (金) 01:20:07 - K スライドチャンバーは細胞によってはかなり接着しにくくかつ剥がれやすいことがあります。そのような時は丸型カバーストリップあるいはガラスボトムdishを検討ください。ある程度改善すると思います。

L6細胞が丸くなる解決策 削除/引用 No.9882-1 - 2021/08/26 (木) 18:19:04 - まっちゃ 初めまして。 現在私はラット筋芽細胞培養株L6細胞にプラスミドを用いて輸送担体のレポーター遺伝子を導入し、レポーターが発現しているかどうかを、スターベーションの後にインスリン刺激を行い、蛍光免疫染色によって確認しているのですが、細胞の約8割が正常な形を保たずに丸くなってはがれてしまい、抗体で染められません。 8ウェルチャンバースライドに再播種して接着を確認したときは仮足を伸ばしていて正常な形をしているのですが、1xPBSをp1000ピペットを用いて洗浄するたびに細胞が丸くなって少なくなります。できるだけ流速を遅くして洗浄していますが、複数のチャンバースライドを使うので1xPBSに浸かる時間が長くなることにも原因があるのではないかとも考えており、八方塞がりです。 レポーター遺伝子を導入していないL6 細胞でも同様で、ポリL-リシンコートやコラーゲンコートも試しましたが駄目でした。 どなたか詳しい方がいらっしゃればご教示ください。

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