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(無題) 削除/引用 No.10068-2 - 2021/11/25 (木) 04:28:49 - おお RNAで修飾するときにNLSのアミノ酸が反応してしまっているのでは？たしかリジンとか多く含み試薬によってはクロスリンクのターゲットになるアミノ酸だし。あとはタンパクがアグってしまっているか。

RNP (GFP+修飾RNA)の核内局在の観察法 削除/引用 No.10068-1 - 2021/11/24 (水) 20:39:43 - 学部生 お世話になります。 現在、GFP変異体 (核移行シグナル付加)に修飾RNAを融合させてRNPを形成させ、HEK293細胞の核内にエレクトロポレーションまたはRNP試薬で導入を試みています。しかし導入してみると、RNPは細胞質にダマ状で多く局在して、核内にはごく少量しか局在しておりません。そのため、核内を共焦点顕微鏡で観察すると、細胞質にあるGFP由来の強い蛍光に合わせてしまい、核内にある弱い緑色蛍光が観察できません。 細胞質にあるGFPの排除方法または、RNPの核内導入効率を上げる手段をご存じでしたら教えてください。 よろしくお願いいたします。

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