Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

コスミドベクター トピック削除
No.1010-TOPIC - 2012/10/11 (木) 17:09:54 - み
コスミドベクターをファージにパッケージングすることなく、
ダイレクトに大腸菌コンピテントセルにトランスフォームすることは可能ですか?
ベクターサイズは45kbです。
また可能なら、形質転換効率やベクター収量の点でお勧めのコンピテントのストレインはありますか?

宜しくお願いします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



6件 ( 1 〜 6 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.1010-6 - 2012/10/12 (金) 09:34:37 - み
>[Re:4] Harmoniaさんは書きました :
抽出したコスミドを再導入するなら、形質転換効率はそんなに気
> にしないので、プロトコール通りの1/10量のライセートで十分です。
>
> ご近所で、分けてもらえませんか?

Harmoniaさん有難うございます。周りにファージを扱っているラボがないのと高価なので現在保有のコンピテントでトライしてみます。


>[Re:3] APさんは書きました :
> たぶん、electroporationでできると思います。
> もっと大きいBACなんかでもそうやりますから。
> ケミカル法では望み薄でしょう。
> 使用可能な宿主は、コスミドの遺伝子型がわからないと判断できないと思いますし、収量は宿主よりもコスミドのoriの種類によって決まると思います。

APさんは有難うございます。エレポは幸い所有しているのでそちらでもトライしてみます。宿主の選択に関しては仰る通りでした。しかしベクターサイズが大きくなると抜け落ちたり収量が悪くなるかと懸念したもので・・。問題になった場合、一般的な対処法(温度を下げたりしてゆっくり増殖させるなど)を試みたいと思います。


>[Re:2] ~さんは書きました :
> こういうタイトルの文献はありますね。

〜さん御教授ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.1010-5 - 2012/10/12 (金) 09:31:40 - ~
ごめんなさい〜
張り忘れていました。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8146914

(無題) 削除/引用
No.1010-4 - 2012/10/12 (金) 08:25:24 - Harmonia
パッケージングのライセートは高価なのでコスミドクローンを数個程度しか
扱わないなら、ダイレクトに大腸菌コンピテントセルにトランスフォームし
たいですよね。

うちは、しょっちゅうコスミドを使うので、ライセートでパッケージングし
ています。抽出したコスミドを再導入するなら、形質転換効率はそんなに気
にしないので、プロトコール通りの1/10量のライセートで十分です。

ご近所で、分けてもらえませんか?

(無題) 削除/引用
No.1010-3 - 2012/10/11 (木) 17:39:57 - AP
たぶん、electroporationでできると思います。
もっと大きいBACなんかでもそうやりますから。
ケミカル法では望み薄でしょう。
使用可能な宿主は、コスミドの遺伝子型がわからないと判断できないと思いますし、収量は宿主よりもコスミドのoriの種類によって決まると思います。

(無題) 削除/引用
No.1010-2 - 2012/10/11 (木) 17:23:18 - ~
こういうタイトルの文献はありますね。

コスミドベクター 削除/引用
No.1010-1 - 2012/10/11 (木) 17:09:54 - み
コスミドベクターをファージにパッケージングすることなく、
ダイレクトに大腸菌コンピテントセルにトランスフォームすることは可能ですか?
ベクターサイズは45kbです。
また可能なら、形質転換効率やベクター収量の点でお勧めのコンピテントのストレインはありますか?

宜しくお願いします。

6件 ( 1 〜 6 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。