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(無題) 削除/引用 No.10338-3 - 2022/03/15 (火) 11:20:36 - asd 4回の培地交換は測定前に行っています。 siRNA実験のため、最低24時間の培養が必要だったのですが、初代心筋細胞が死にやすいため、6時間に1度の培養液交換を行いました。 100k/cellは6wellで行った時の間違いでした。実際の数値は不明ですが(オペレーターが別の人)、適切な量+aなはずです。 Trizol前に細胞は見ました。明らかに元気はなかったですが、存在はしていました。

(無題) 削除/引用 No.10338-2 - 2022/03/15 (火) 09:52:43 - おお 100K/well って多すぎないですか？ 細胞外フラックスアナライザー測定後に４回も培地を交換するのに加え一日培養をし続ける意味はなんですか？ Trizolで回収する直前に細胞を観察しましたか？ RNAのペレットは見にくくなっているかもしれません。アルコールを飛ばして水かTEなどを加えて濃度図るとRNAが回収されていることが確認できる事もあります。

細胞外フラックスアナライザー後にRNA抽出 削除/引用 No.10338-1 - 2022/03/15 (火) 04:53:00 - asd 教授の命令で細胞外フラックスアナライザー後にRNA抽出しようと試みたのですが、ペレットが得られませんでした。どなたか細胞外フラックスアナライザー後にRNA抽出できた方いらっしゃいますでしょうか？ 条件は以下の通りです。 ・心筋細胞 (100K/wellくらい？ただし、以下の通り４回メディア交換しているのでもっと少ないと思います) ・24時間インキュベーション→細胞外フラックスアナライザー測定→20-30分CO2無のインキュベーターで温 (細胞外フラックスアナライザーとオペレーターが違うためこのように) ・6時間に1回メディア交換 (つまり4回交換しました) ・trizolは300ul/well。2-3wellを1つのチューブとして収集しました。

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