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(無題) 削除/引用 No.10430-4 - 2022/04/29 (金) 00:57:24 - おお こういうのは同じようなサイズ、ピースの数のクローニングでも同じシステムをつかってあるものはうまく行ったり、他のものはうまくいかなかったりするものです。なのでどれが優れているというのは意外と結論が出ませんし、人によって言うことが違ったりします。 末端に共通配列（オーバーラップ）があるなら以下のようにPCRでつなげる手法も一時はよくやられていたと記憶します。 https://openwetware.org/wiki/PCR_Overlap_Extension まあ、効率にこだわっているようですし、効率が良いほどあたりが出る確率が高くなるでしょうけど、１つだけあたりのクローンを見つけた段階で成功ではあります。

(無題) 削除/引用 No.10430-3 - 2022/04/28 (木) 22:01:46 - 独り言 比べたことないけど、Gibsonをいつも使っていて効率がいいなぁと思ってます。4，5断片までならGibsonで問題なく、効率的に取れている。 ちなみに、それって全長で何ベースなんですか？ もし2000−3000bp程度なら、むしろ私なら、遺伝子合成しちゃう。gBlockなら3,4万円ぐらいでしょ。

(無題) 削除/引用 No.10430-2 - 2022/04/28 (木) 21:05:18 - あかね いずれの方法でも12断片をassembleするのはかなり難しいと思っていいです。 Golden Gate assemblyかOriciroのassemble systemを強く勧める。

マルチクローニング 削除/引用 No.10430-1 - 2022/04/28 (木) 20:59:30 - 時は金なり 大学院生です。 今、DNA12断片を１つに繋げようとしていて、一度にマルチクローニングする、もしくは段階的に複数断片ずつ繋げていくことを考えています。 そこで、相同配列を利用して複数のDNA断片を繋げたい場合、in-fusion、NEBuilder、Gibson assemblyなどのクローニングシステムが挙げられますが、どれが1番効率が良いでしょうか。 最終的なプラスミドのサイズは20kb近くになりそうです。

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