Bio Technical フォーラム

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電気泳動後のバンドがいびつ トピック削除
No.10452-TOPIC - 2022/05/10 (火) 16:50:37 - bb
PCR反応により目的遺伝子を増幅した後の電気泳動により得られたバンドがいびつで凸凹しています。
原因を知っている方ご教示願います。
 
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(無題) 削除/引用
No.10452-7 - 2022/05/11 (水) 11:22:54 - mont
アガロースが完全に溶けてなかった?

ゲルを作る時に不純物(小さいごみ)が混入した?

ゲルがちゃんと固まる前にコームを抜いてしまった?

コームが汚かった?(コームにテープを貼る人がいる場合は要注意)

アプライしたDNAの量が多すぎた?(マーカーの濃さと比べて極端に濃いバンドが出る場合)

電圧が高すぎた?

染色液がちゃんと溶けてなかった?

もし、あなたが「まさか」な事をしていた場合、他人には思いもよらないことが原因かもしれません。

(無題) 削除/引用
No.10452-6 - 2022/05/11 (水) 09:56:17 - 海藻
まあ、ご本人からの情報を待ちましょうよ。

(無題) 削除/引用
No.10452-5 - 2022/05/11 (水) 01:04:56 - おお
https://www.takarabio.com/products/cloning/agarose-gel-electrophoresis

こちらのLane2のような感じならまあそんなもんかなとおもう。長いDNAは少しテーリングが局所的に起こったりしてバンド上部がぎざぎざでたまに筋が見えたりする。

泳動する量、泳動の速さである程度コントロールできるとはおもう。

(無題) 削除/引用
No.10452-4 - 2022/05/10 (火) 19:31:31 - あの
初心者がよくやることなら、

ゲルが分厚すぎる
ロードするDNAが多すぎる
ウェルの中にクズが入っている

など。

(無題) 削除/引用
No.10452-3 - 2022/05/10 (火) 17:29:29 - 774
> バンドがいびつで凸凹しています。
分かりにくいので写真載せたほうがいいですよ。

アガロースが均一に溶けていなかった?
先染めなら均一に混ざっていなかった?
後染めなら容器に色素の溶け残りが付着している?
撮影装置が赤系の色素で汚染されてる?

SDS-PAGEだとコームを抜いた後ウェルを泳動バッファーで洗ったりしますが、アガロースゲルでこれは普通不要だろうし。

細かいことだけども、原因を知っているとしたら貴方だけで、他の人は思い当たるだけで知りはしませんよ。

(無題) 削除/引用
No.10452-2 - 2022/05/10 (火) 16:53:54 - G25
>バンドがいびつで凸凹しています。

どういう状況なのかよく伝わってこない。

電気泳動後のバンドがいびつ 削除/引用
No.10452-1 - 2022/05/10 (火) 16:50:37 - bb
PCR反応により目的遺伝子を増幅した後の電気泳動により得られたバンドがいびつで凸凹しています。
原因を知っている方ご教示願います。

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