Bio Technical フォーラム

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サンプルの保管方法 トピック削除
No.10469-TOPIC - 2022/05/18 (水) 12:38:35 - トラブルシューティング
SDS-PAGEのサンプルの保管方法についてお聞きしたく質問させていただきます。
SDS-PAGEのサンプルはSDS サンプルバッファーを加えた後、ボイルして、室温で保管しています。

1カ月くらい室温に放置していたのですが、これは問題ないでしょうか?

問題ないと思って放置していたのですが、バンドがぼやけるサンプルや、バンドが現れないサンプルなど、謎の現象が起こっており、頭を抱えています。
 
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(無題) 削除/引用
No.10469-6 - 2022/05/25 (水) 11:35:57 - トラブルシューティング
なるほど。
サンプルバッファーを加えたら、タンパク質が完全に変性するので、室温放置でも冷凍保存でも変わらないと思っていましたが、そうではないのですね。

還元剤が劣化するというのも確かにその通りだと思いました。

ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.10469-5 - 2022/05/20 (金) 04:23:40 - あの
抗体とターゲットによるとしか言えないです。


分解の他に、ターゲットの構造に変化が起きることなんて、
色々なメカニズムがあるから、抗体が結合できるかどうかも変わる。

だから、何も不思議ではなく、謎では無いです。

(無題) 削除/引用
No.10469-4 - 2022/05/19 (木) 03:30:20 - おお
基本ー70度フリーザーです。翌日使うぐらいならー20でもいいかもしれませんがサンプルによるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.10469-3 - 2022/05/18 (水) 16:22:01 - s3δ4f5
SDS-sample buffer に溶かしたサンプルでも−70~-80℃保存し、何度も使う場合は分注するなどして凍結融解の反復回数は出来るだけ抑えてください。
長期的には残存するproteinase 活性による緩慢な protein degradationも起こり得ますし、還元剤の効果が低下してくるので、SH基の再酸化などは実際に起こります。−30℃くらいでも起こるので、室温保存ですとこうした試料の変質はより早く起こります。

tricine系です 削除/引用
No.10469-2 - 2022/05/18 (水) 12:49:36 - トラブルシューティング
補足情報ですが、行っているSDS-PAGEはtricine系です。

loading controlのtubulinは普通に見えています。
しかし低分子域のタンパク質がぼやけたり、見えなかったりです。。。

サンプルの保管方法 削除/引用
No.10469-1 - 2022/05/18 (水) 12:38:35 - トラブルシューティング
SDS-PAGEのサンプルの保管方法についてお聞きしたく質問させていただきます。
SDS-PAGEのサンプルはSDS サンプルバッファーを加えた後、ボイルして、室温で保管しています。

1カ月くらい室温に放置していたのですが、これは問題ないでしょうか?

問題ないと思って放置していたのですが、バンドがぼやけるサンプルや、バンドが現れないサンプルなど、謎の現象が起こっており、頭を抱えています。

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