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Western blotのゲルをうまく分割する方法 トピック削除
No.10480-TOPIC - 2022/05/21 (土) 23:18:39 - みみ
Western blotのゲルを複数の抗体で使えるように、うまくハサミで分割する方法はありますか？もちろんマーカーを挟めば切れるのですが、できれば、マーカーも減らしたいと考えています。
　
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No.10480-10 - 2022/05/24 (火) 12:48:55 - mont
サイズの違うターゲットの場合。
転写後のPVDFをカッティングボードに載せて、直接、金定規を載せてカッターで切ってます。
厳密に切り分けたい時は、両端に色付きマーカーを流す。
大雑把でいい時は片側のみ色付きマーカー。

同じサンプルを複数の抗体でみたい場合は、横長のウェルに流して転写後にメンブレンを短冊状に切るか、前出のバイオラッドの製品を使うか。

どちらにせよ、ゲルを切るより、転写後にメンブレンを切る方が簡単ではないですか？

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No.10480-9 - 2022/05/23 (月) 12:42:23 - 独り言
カッティングマット、カッター、定規、フィルム（ハイぶりバックみたいな）を１００均で購入して、
ポンソーで染色後に、フィルムで挟んで、カッティングマットの上で定規とカッターを使って、スパッと切ります。

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No.10480-8 - 2022/05/23 (月) 11:43:57 - momo
メンブレンを切らないで同じようなことを実現する装置も市販されています。安くないけど。

https://www.bio-rad.com/ja-jp/product/mini-protean-ii-multiscreen-apparatus?ID=f9ec3085-b590-44c6-9b36-b36876cad466

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No.10480-7 - 2022/05/23 (月) 09:25:56 - てて
いろいろなやり方があって面白いですね
こういうちょっとしたtipsってプロトコルには載ってないけど実験の快適さを上げる大事な要素だと思っていつもありがたく読ませてもらってます

ちなみに私はブロッキングまで実施しないとなんとなく気持ちが悪いのでブロッキングした後でOHPで挟んでOHPごとハサミでカットしてます
マーカーのレーン節約するために
サンプル-マーカー-サンプル
のように並べて『マーカー上』を切ったりしてます
そうすると1レーンで左右にマーカーが乗るので

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No.10480-6 - 2022/05/22 (日) 16:33:26 - G25
ゲルを切る人はおらんやろう。
ブロットしたメンブレンにを切るものだ。
メンブレンをポンソーなどで染めてサランラップで挟んで、定規とカッターを使ってサランラップごと切る。

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No.10480-5 - 2022/05/22 (日) 02:10:09 - 774R
同じサンプルを様々な抗体でWBするときは、コームでウェルを作らず、全面フラットな状態でサンプルを乗せて泳動して、トランスファーしてからメンブレンを短冊状に切ると沢山処理できます。

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No.10480-4 - 2022/05/22 (日) 00:48:47 - wedrftg
多くの人はblotしてからmenbraneを切ると思います。その方が簡単だし失敗しないです。膜はピンセットでつまんで軽くふって少しbufferがなくなると転写したタンパク質の跡がしばらくの間は見えます（少なくともImmobilon Pは見えます）から（乾燥させないようにこの辺はなるべく手早く）ボールペンで点で切るべきところを記しつけるといいです。サンプル数が少なくてレーンが余るくらいならばマーカーで仕切ってもいいです。

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No.10480-3 - 2022/05/21 (土) 23:56:31 - TS
あ、ガラス板とかの上でカッターで切ればきれいに切れます。

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No.10480-2 - 2022/05/21 (土) 23:54:40 - TS
ゲルじゃなくて、PVDFを切っている人が多いと思う。
PonceauSで染めてから切れば間違いはなし。
マーカーの位置は厳密性をどこまで考えるかだけど別に1レーンでもいけると思う。

Western blotのゲルをうまく分割する方法 削除/引用
No.10480-1 - 2022/05/21 (土) 23:18:39 - みみ
Western blotのゲルを複数の抗体で使えるように、うまくハサミで分割する方法はありますか？もちろんマーカーを挟めば切れるのですが、できれば、マーカーも減らしたいと考えています。
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