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(無題) 削除/引用 No.1055-5 - 2012/10/26 (金) 19:49:38 - ma- 初歩的な質問にも関わらず、ご回答ありがとうございました。 みなさんの回答を参考に考えてみると、購入したキットで、十分測定できそうでした。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1055-4 - 2012/10/25 (木) 18:39:29 - TS ご購入されたキットは、細胞内のLDHを測定するために設計されているのではないですか。 毒性試験の場合、細胞が損傷したときに培地中へ放出されたLDHを測定することで毒性を評価します。 ですから、どのような培養条件でも基本的には問題ありませんで、 ご自身の評価したい薬剤を細胞に作用させて、一定時間後に上清を回収し、 その上清中のLDH活性を測定しましょう。 毒性が高ければ短時間でも十分なLDH活性が得られますし、 毒性が弱ければ、長めの処理時間が必要になるだけです。

(無題) 削除/引用 No.1055-3 - 2012/10/25 (木) 16:10:23 - 通りすがり LDHはキット買わなくても、いくつかの試薬を購入すれば測定できますよ？ 上清中の吸光度を測定できればですが…。 まず、キットを使用せずに各時間変化で最もLDH活性が高いポイントを探して、その条件に合わせて96wellで培養しながら測定してみたらどうでしょうか？ 分化させるということは、１週間程度は培養するということですよね？ 個人的には増殖段階で薬剤が影響すると思うので、そこまで時間変化を気にする必要もないと思いますが…。 分化後に薬剤を添加してLDHを測定するのはどうなんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1055-2 - 2012/10/25 (木) 14:08:30 - おお LDHで発色させるきっとなら、上せいを使っても測定できるんじゃないの?キット方法は使用例と言うことじゃないかなぁと思うけど。書いている説明から勝手な想像をするに、そのプロトコールはプレートのwellの中に入る細胞を溶解して、細胞数を見積もるプロトコールじゃないかなぁと。

細胞毒性測定 削除/引用 No.1055-1 - 2012/10/25 (木) 13:29:09 - ma- 細胞毒性を初めて調べます。 LDHで評価しようと思いキットを購入したのですが、そのキットの説明書には、96wellに細胞を播種した翌日、上清を抜いてPBSで洗浄してから薬剤を入れ、その15分後に発色させて測定という方法で書かれていたのですが、私としては、その短時間で細胞毒性が確実にわかるのか疑問です。 その15分というのは、多少実験によって変えてもいいそうですが、私は、ある細胞を分化させるためにその薬剤を入れて、数日間の分化中に細胞毒性がないかどうかを見ようと思っていたので…（3日ごとに培地交換をして） 説明書だと、測定の直前に薬剤を入れているだけなので、これで毒性がわかるのでしょうか？ それに上清を抜いてしまったら、遊離したLDHも抜けてしまいますよね？ これは、私のキットの選択ミスでしょうか？ 上清を使って測定するキットを買うべきですか？ かなり初心者な質問で申し訳ないのですが、教えて下さい。

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