Bio Technical フォーラム

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分子量マーカで低〜中分子で蛍光で使えるもの トピック削除
No.10578-TOPIC - 2022/06/25 (土) 13:01:24 - あああ
お世話になっております。
FITC蛍光標識した分子量2.5kDaのペプチドのSDS PAGEをしております。
FITC修飾ペプチドの合成は外注しているのですが、純度の問題なのか、泳動してゲルを蛍光撮影すると複数本バンドがあります。
合成がうまくいっていない短いペプチドや、修飾されなかった過剰なFITCが混じっているのだとすると、おそらく一番分子量が大きいバンドが本来のペプチドのバンドかとは思っているのですが、本当にそれでよいのか確認したいと思っています。
電気泳動のマーカーで1kDa, 3.5kDaくらいまでの低〜中分子のマーカーが入ったもので、蛍光で使えるものを探しているのですが、なかなか見つかりません。
もしご存じの方がおられたら教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.10578-3 - 2022/06/26 (日) 19:12:36 - あの
外注先に、次に確認したらどうでしょうか?

 標識前の原料のペプチドの純度やHPLCのクロマトグラム
 標識後の精製法

SDSPage の画像も見せて、見解を聞いてみる。

それから
純度がよくても複数バンドになる可能性もありえるから、
あまり深く考えずに、実験に使ってみる。

(無題) 削除/引用
No.10578-2 - 2022/06/26 (日) 11:16:37 - おお
別に蛍光ラベルがついていなかったとしても、Bright imageをとってマージすれば済むんじゃないかと。。。
また、それぐらいの大きさのペプチドになると電荷やSDSの結合の度合いで実際の分子量から大きくブレた位置に泳動されることも多いので2倍ぐらい大きいからと言ってそれがものでないとも結論付けれないかと。

まあどうしてもと言うならマーカーとしてではないけどFITCでラベルしたペプチドは売っているのでその中から使えそうなのをピックアップして買うとかできなくはないでしょう。

分子量マーカで低〜中分子で蛍光で使えるもの 削除/引用
No.10578-1 - 2022/06/25 (土) 13:01:24 - あああ
お世話になっております。
FITC蛍光標識した分子量2.5kDaのペプチドのSDS PAGEをしております。
FITC修飾ペプチドの合成は外注しているのですが、純度の問題なのか、泳動してゲルを蛍光撮影すると複数本バンドがあります。
合成がうまくいっていない短いペプチドや、修飾されなかった過剰なFITCが混じっているのだとすると、おそらく一番分子量が大きいバンドが本来のペプチドのバンドかとは思っているのですが、本当にそれでよいのか確認したいと思っています。
電気泳動のマーカーで1kDa, 3.5kDaくらいまでの低〜中分子のマーカーが入ったもので、蛍光で使えるものを探しているのですが、なかなか見つかりません。
もしご存じの方がおられたら教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いいたします。

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