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(無題) 削除/引用 No.1058-6 - 2012/10/26 (金) 09:30:23 - qq ＞10cm dish 1枚分からRIPA bufferにより抽出し、 1ml程度ですか？ ＞metOH/クロロホルム沈殿により濃縮（1ug分）し、 1ug分とは、どういう意味ですか？タンパク量ですか、それとも、固形物の重量なのですか？ クロメタで細胞のRIPA抽出液を振ると、クロロフォルム相には、SDS,DOC,NP40、細胞の脂溶性成分が、水相には塩などが分配して、タンパク質はクロロフォルム相と水相の間に、タンパク質相としてパックしますが、そのような理解でよろしいですか？？

(無題) 削除/引用 No.1058-5 - 2012/10/26 (金) 08:58:32 - おお トリプシン処理後に沈殿させてるのですか? それなら方法論的にどうなんでしょう、、、

(無題) 削除/引用 No.1058-4 - 2012/10/26 (金) 08:50:28 - aaa おお様 細胞内で発現しているタンパクの中に次の実験でtargetととする因子があるかどうかというものを確かめるための前実験でおこなっております。 サンプル調整の段階でアルキル化、トリプシン処理はおこなっているのですが、かたまりとなっているためMSにかけてもタンパクが検出されないという状況です。

(無題) 削除/引用 No.1058-3 - 2012/10/26 (金) 01:59:44 - おお tryosin->trypsin

(無題) 削除/引用 No.1058-2 - 2012/10/26 (金) 01:58:31 - おお まあ可也解けにくいものもあるので、そうなるだろうとおもいますが、、、タンパクをそのまま直接MS解析ですか? ちょっとやりたいことが見えませんのでなんともいえませんけど。。。 tryosinなどは使わないのでしょうか?

MS解析のbuffer 削除/引用 No.1058-1 - 2012/10/25 (木) 17:53:02 - aaa 現在MS解析を行おうとしています。 サンプルは細胞のwhole cell lysisです 10cm dish 1枚分からRIPA bufferにより抽出し、metOH/クロロホルム沈殿 により濃縮（1ug分）し、20ulの重炭酸アンモニウムに懸濁しているのですが、 タンパクが固まりとなって溶けません。完全にペレットを乾かしているわけではないのに、 なぜかとけません。RIPAの組成（NP-40,SDS）がMSのbufferには不向きなのでしょうか？ MSに詳しい方、どなたか教えていただけないでしょうか

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