全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.1066-2 - 2012/10/29 (月) 04:45:23 - おお >[Re:1] 困っている大学院生さんは書きました : > いつも、勉強させてい頂いています。 > サイレンシングが主な原因だと考えているのですが、このような事は良くある事なのでしょうか？ 頻度はなんとも言えませんが、まあまああるのではないかとおもいます。 特に強い発現をさせると > > また、サイレンシングを防ぐためにはMSCVなどのレトロウイルスベクターに変更すれば改善出来るものなのでしょうか？ プロモーターのメチル化などが考えられていますので、プロモーターをいじるのが直接的だと思います。もちろんベクターを変えることにより説明つかないが違うことが期待できるのは確かです。 おしめしのプラスミドはたしかCAGプロモーターだとおもいますが、少し強すぎるためかえって反動があるのかもしれません。CMVとか(CMVもサイレンシングはよく問題になります)、もう少し弱いプロモーターにするのもてです。それか思い切ってTET誘導性のものとか。

ウイルスベクターのサイレンシング 削除/引用 No.1066-1 - 2012/10/29 (月) 02:59:21 - 困っている大学院生 いつも、勉強させてい頂いています。 現在、クローニングしたcDNAをpMX-IGにサブクローニングしマウスのT細胞に導入して実験を行っています。 ベクターにires-EGFPが入っているため、transfectionした後に一度GFP陽性細胞をsortingしてから実験をおこなっているのですが、sortingして培養しているとGFPの蛍光強度が落ちてきて目的のタンパクが発現していない細胞が出てきます。 サイレンシングが主な原因だと考えているのですが、このような事は良くある事なのでしょうか？ また、サイレンシングを防ぐためにはMSCVなどのレトロウイルスベクターに変更すれば改善出来るものなのでしょうか？ 今後、造血幹細胞に遺伝子導入しBMキメラを作成する予定なのですが、MSCV以外で造血幹細胞に適したベクターがありましたら教えて頂けますでしょうか？

全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---