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細胞への遺伝子導入方法を教えてください トピック削除
No.10912-TOPIC - 2022/10/31 (月) 09:42:23 - たこ
細胞に欠損した炎症性サイトカインの導入について伺いたく存じます。
本来は LPS に反応して増加する遺伝子・タンパク質(TLR4 および Tnf など)がこの細胞では欠損していたため、遺伝子や蛋白質の導入を考えています。TLR4 は Tnf の上流ですので、両方を導入したほうがよろしいでしょうか?

その場合は、Recombinant Tnf (アゴニスト?) 投与や他の適切な方法を理解しておりません、教えていただければ幸いです。

培養細胞で導入がうまくいった場合、マウスの脳内への遺伝子導入も行いたいと考えています。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.10912-2 - 2022/11/01 (火) 02:52:36 - おお
>TLR4 は Tnf の上流ですので、両方を導入したほうがよろしいでしょうか?
あなたの実験の目的次第です。ですからそれを知らないこのフォーラムを見ている人が答えられるとは思えません。答えたとしてもあなたの目的にあっているかどうか不明です。

TNFはTLR4によるNFkBの活性化により発現が促進されるようですが、発現ベクターはCMVなどConstitutiveに発現するものが大抵であり、そのばあいTLR4がLPSなどにより活性化するのとは関係なくTNFが産生されてしまう可能性があります(プロモーター、エンハンサーを内在性TNFに近いものにするというやり方はなくはないですが)。もちろん分泌経路などのTLR4の影響とか調べるならそれでもいいのかもしれません。要するに目的次第でしょう。

細胞への遺伝子導入方法を教えてください 削除/引用
No.10912-1 - 2022/10/31 (月) 09:42:23 - たこ
細胞に欠損した炎症性サイトカインの導入について伺いたく存じます。
本来は LPS に反応して増加する遺伝子・タンパク質(TLR4 および Tnf など)がこの細胞では欠損していたため、遺伝子や蛋白質の導入を考えています。TLR4 は Tnf の上流ですので、両方を導入したほうがよろしいでしょうか?

その場合は、Recombinant Tnf (アゴニスト?) 投与や他の適切な方法を理解しておりません、教えていただければ幸いです。

培養細胞で導入がうまくいった場合、マウスの脳内への遺伝子導入も行いたいと考えています。

よろしくお願いいたします。

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