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(無題) 削除/引用 No.10995-3 - 2022/11/29 (火) 12:33:05 - G25 バンド強度の比較は可能だけれど、あくまでそれはバンド強度の比較。それだけでは発現量の比較と言うには不十分。 >PCRのテンプレートDNA濃度は統一してあるので、 これではnormalizeさている証拠にならない。 濃度測定の誤差、プレパレーションごとの増幅効率の違いなどによるブレを排除できない。やはりこういう実験でも内部標準を取る必要性がある。 >この方法でA群とB群の遺伝子発現量の大小は比較できると考えているのですが、 マーカーのバンド強度を指標に半定量することはよくあるが（目視による比色のほかImageJなどで検量線を引くことも可能）、この場合、サンプル間の相対量比較なのであまり意味ないかも。むしろ、サンプルの方を希釈列にしてPCRして検量線を引き、サンプル同士でバンド強度が釣り合う希釈率を見るとか。 end-point PCRでqPCRする方法はreal-time PCRが世に出る前からあるので、まず文献や実験書などを調べて、受け入れられている方法にそってやるのがいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.10995-2 - 2022/11/29 (火) 12:08:22 - AA PCRの各条件や検出の条件が適したものであればアガロース電気泳動で得られたバンドのシグナル強弱で鋳型となったcDNA量を評価することは可能です。 半定量PCR　などと調べると情報が出てくると思います。 ただし、コメントが付くと面倒なので定量PCRやその他の定量実験(核酸以外も含めて)を行うことが多いとは思います。

アガロース電気泳動からの遺伝子発現量比較方法に関して 削除/引用 No.10995-1 - 2022/11/29 (火) 11:26:19 - tetani A群とB群からある遺伝子をPCRして複数枚のアガロースゲル電気泳動を行ったところ、 バンドの有無および強度から遺伝子の発現量に差がありそうでした。 なんとかこの電気泳動像から客観的に発現量を比較したいです。 現状では、imageJを用いて泳動時に同時に流しているDNAサイズマーカーのバンド強度を測定し、 それを基準として、複数のゲルのA群とB群の遺伝子発現量を相対的に比較しようかと考えています。 サイズマーカーのアプライ量と、PCRのテンプレートDNA濃度は統一してあるので、 この方法でA群とB群の遺伝子発現量の大小は比較できると考えているのですが、 そのようなDNAサイズマーカーを基準とした比較は見たことがありませんでしたので、 この方法が通用するのか知りたく、この度質問させていただきました。 初歩的な質問かと思いますがご教授いただければ幸いです。

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