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(無題) 削除/引用 No.11022-3 - 2022/12/08 (木) 23:51:31 - おお あ、あとそのDNAを何に使うか次第でRNAが結構混じっていても邪魔にならない事も多いです。制限酵素で切ってinsert などのサイズ確認ぐらいなら、むかしのキットを使わない方法で、制限酵素処理して電気泳動して見るとRNAが残ってたなってことはまあまあありましたし。またそう言うミニプレップはRNAが除けないので、制限酵素処理する際にRNaseを加えたりもします。

(無題) 削除/引用 No.11022-2 - 2022/12/08 (木) 21:21:40 - おお RNA と　DNAは波長特性がかなり似ているので、DNAが1.8、RNAが2.0と出るようなコンディションで両者が混じっているならほとんどがRNAと言ってもいいでしょう。しかし、それは理想的な状態での数字で、バッファー中、あるいはpHによっても比がぶれるものです。ですから私は気にしないです。DNAを精製するカラムのコンディションも一般的にはよく樹立されているようで、RNAが混じって困るような経験はありません。 RNAのコンタミを確かめるには、電気泳動してエチブロで染めれば、それなりの量有れば100ベース以下のあたり蛍光が観察されます。他の蛍光色素を使っているならRNAに対しての特性を確認してみるといいでしょう。 それでもRNAが気になるなら、PEG沈という手は取れなくもないです。あるいは再度カラムにのせるか。

mini prep産物のA260/A280が高すぎる 削除/引用 No.11022-1 - 2022/12/08 (木) 18:52:21 - c FastGene Plasmid Mini Kit（日本ジェネティクス）を使用して大腸菌コロニーからプラスミドの抽出および精製を行っています。 DNAの場合A260/A280は1.8くらいが望ましいと思いますが、2.0前後の値が出てしまいます。既にRNAse入りのバッファーでの洗浄ステップは含まれているのですが、RNAのコンタミを疑っております。何か確かめるのに良い方法はありますか？ また他に考えられる原因がありましたら教えてください。

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