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RNAのフェノクロについて トピック削除
No.11030-TOPIC - 2022/12/11 (日) 13:36:17 - たろう
vitro転写で作成したRNAをph8のTE飽和フェノクロで抽出すると、精製可能でしょうか?
またph8ではRNAが不安定と聞きますが、どれくらいのものなのでしょうか?
 
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No.11030-3 - 2022/12/11 (日) 15:26:11 - おお
精製できるし、安定性もタンパクの結合みるとか言うぐらいの実験で問題になったことはない。DNA以外を除去するなら普通に使ってきたし。アルカリ性でRNAを分解する方法はあるが、NaOHを使うなど非常に極端な条件が使われる。

in vitro transcription をしているなら、テンプレートのDNAを除くのに酸性フェノールの方がベターな選択だったのではなかろうか。私はTRIZOLやRNAzolで合成したRNAを回収するだろうな。

(無題) 削除/引用
No.11030-2 - 2022/12/11 (日) 15:02:02 - G25
いや別に、不安定になるってことないですよ。
DNAでもRNAでも核酸の精製はpH 8程度のバッファで飽和したものが使えます。
ただ、RNAの場合はpH 4程度の酸性条件でも水層に分配されるのんい対し、DNAはフェノール層や中間層にいってしまうのでpHを上げておくのが必須というだけ。AGPC法などは逆にこの性質を利用して低pHのフェノールでDNAとRNAを分離してRNAを精製しているのです。

低pHだと核酸のリン酸基がプロトン化され電荷が中和されるので極性が低下します。それでもRNAはリボースの水酸基(と、ひょっとすると塩基対をなしていない塩基)の関係で水層に残りますが、DNAは水層から締め出されるんですね。

RNAのフェノクロについて 削除/引用
No.11030-1 - 2022/12/11 (日) 13:36:17 - たろう
vitro転写で作成したRNAをph8のTE飽和フェノクロで抽出すると、精製可能でしょうか?
またph8ではRNAが不安定と聞きますが、どれくらいのものなのでしょうか?

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