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Real time PCR Primer設計 トピック削除
No.11033-TOPIC - 2022/12/12 (月) 17:04:13 - RT
こんばんは

ヒトの遺伝子の定量用プライマー設計についてなのですが
論文でマウスやラットのプライマーの情報を拾ってきて、それをそのままヒトのオーソログタンパク質と照らし合わせて、プライマーの標的配列の相同性が高そうであれば、標的部位としてはその部分を標的にしてPCRを実施すればうまくいくでしょうか

配列自体はヒトの遺伝子の配列に相補的になるように調整するとして、標的部位の話です。(Tm値等はそれほど変わらないものとします)
 
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(無題) 削除/引用
No.11033-5 - 2022/12/13 (火) 02:54:32 - おお
>[Re:4] ウェrちさんは書きました :
> 実際に使われた論文から引いてくるのが一番確実だともうけど、primer3とかフリーのプライマー設計サイト利用するのも一つとは思う。

>[Re:3] RTさんは書きました :
> ありがとうございます
> とりあえずやってみます
> いくつかの遺伝子については、ヒトでやってる文献が見つからないんですよね、、、



見つからないというのもちょっと不思議な気がします。あなたの考えている遺伝子の研究状況がわからないのでなんとも言い難いですが、調べ方によっては見つからないということは、、、遺伝子名が開示できるなら文献を知っている人がいるかも知れませんね。

わたしはqPCRとは限りませんが必要な部位に設定したいときは指摘があるようにデザインツールを使うことがあります。マウスやラットのプライマーの情報をもとにそういうデザインツールにインプットしてみてIn silico上ではPCRができそうか確認してみるのも手なのかもしれません。イントロンやスプライシング(特にAlternative splicing)が保存されている保証はありませんのでそういう意味でも何らかの確認はしたほうがいいでしょう。そういうのもデザインツールでできる用になっています。

私が使っているのはWeb上のもので、
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

めぼしい配列があるなら上記のサイトでプライマーを入力して、テンプレートの入力はなくてもいいです。現在確認されている配列などのデーターベースを選ぶと(Refseq mRNAでいいと思う)、そのプライマーでかかり得る(ノンスペを含む)mRNAを表示してくれます。

(無題) 削除/引用
No.11033-4 - 2022/12/12 (月) 19:39:09 - ウェrち
実際に使われた論文から引いてくるのが一番確実だともうけど、primer3とかフリーのプライマー設計サイト利用するのも一つとは思う。

投稿者 削除/引用
No.11033-3 - 2022/12/12 (月) 19:14:32 - RT
ありがとうございます
とりあえずやってみます
いくつかの遺伝子については、ヒトでやってる文献が見つからないんですよね、、、

(無題) 削除/引用
No.11033-2 - 2022/12/12 (月) 18:01:45 - おお
やってみないと分からないのが現状だと思います。実際、上手くいきそうにない配列も2、3ベースずらすと上手くいったりする世界ですから。それよりも文献探して、よく使われている配列や、上手くいっている配列を探した方がいいのでは?

Real time PCR Primer設計 削除/引用
No.11033-1 - 2022/12/12 (月) 17:04:13 - RT
こんばんは

ヒトの遺伝子の定量用プライマー設計についてなのですが
論文でマウスやラットのプライマーの情報を拾ってきて、それをそのままヒトのオーソログタンパク質と照らし合わせて、プライマーの標的配列の相同性が高そうであれば、標的部位としてはその部分を標的にしてPCRを実施すればうまくいくでしょうか

配列自体はヒトの遺伝子の配列に相補的になるように調整するとして、標的部位の話です。(Tm値等はそれほど変わらないものとします)

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