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GFPの光り方の違いについて トピック削除
No.11054-TOPIC - 2022/12/20 (火) 12:26:46 - おお
いつも参考にさせて頂いています。

GFP配列の入ったプラスミドを細胞にリポフェクションすると、同じ細胞でも同一視野の中によく光るものと薄くしか光っていないものがありますが、これは何故、異なる蛍光強度になるのでしょうか。

同じプラスミドでも、転写から翻訳までの量が細胞によって異なるからでしょうか。

それとも、そもそも入るプラスミドの量が違うのでしょうか。

初歩的な質問で申し訳ありませんが、ご教授いただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.11054-4 - 2022/12/21 (水) 16:43:01 - おお
貴重な意見ありがとうございます。

なかなか難しいですね。。。。

(無題) 削除/引用
No.11054-3 - 2022/12/21 (水) 15:01:48 - おお
導入後、シングルクローンを拾っても見た目発現の差があるように見えたりもするので、それぞれの細胞の生理的状況で変動があると言うのもあると思う。特の癌細胞など(クローンを拾ったとしても) karyotypeがバラけるので細胞はヘテロな集団と思った方がいいとおもう。ESやIPS、正常細胞とかでどう振舞うかは知らないけど。

また、丸い細胞とか高さがある細胞は上から見ると、平べったい細胞よりは強く見えるはずです。

細胞の生理状態が個々の細胞で揃ってない(細胞周期とか隣とどの程度どれくらい密に接しているかとか)と言うのは、Transfection の効率にも影響するかもしれませんから、入る量もそれぞれの細胞で違うと言うのもあり得る推測です。

想像の限りではそう言えるのだけど、そう言う点で踏み込んだ実験データーがあるかなど、書く前にちょっと調べたけど、今のところ見つからない。

(無題) 削除/引用
No.11054-2 - 2022/12/20 (火) 13:49:01 - G25
>そもそも入るプラスミドの量が違うのでしょうか。

これが主たる原因でしょう。

GFPの光り方の違いについて 削除/引用
No.11054-1 - 2022/12/20 (火) 12:26:46 - おお
いつも参考にさせて頂いています。

GFP配列の入ったプラスミドを細胞にリポフェクションすると、同じ細胞でも同一視野の中によく光るものと薄くしか光っていないものがありますが、これは何故、異なる蛍光強度になるのでしょうか。

同じプラスミドでも、転写から翻訳までの量が細胞によって異なるからでしょうか。

それとも、そもそも入るプラスミドの量が違うのでしょうか。

初歩的な質問で申し訳ありませんが、ご教授いただければ幸いです。

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