Bio Technical フォーラム

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トランスフェクション後の細胞の状態 トピック削除
No.11073-TOPIC - 2022/12/26 (月) 23:51:01 - d
リポフェクション法で一過的な遺伝子導入を行いアッセイに用いたいと思っています。試薬を細胞に添加しトランスフェクションした後、数時間経ってから培地交換を行い、その翌日に撒き直すプロトコルが多く見られます。トランスフェクション当日、培地を交換した後直ぐに撒き直すのは良くないのでしょうか。トランスフェクション後の細胞はやはり不安定だからやめた方がいいのでしょうか。試したことがある方いらっしゃいますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.11073-2 - 2022/12/27 (火) 13:22:55 - おお
あなたの実験が成り立つなら、だめな訳ではない。やってみてはどうか。
導入直後細胞が不安定と漠然と言うけど、リポフェクション試薬を除かないでそのまま培養し続けるプロとコールもあるのだから何を言っているのかよくわからない。
勿論リポフェクション試薬で毒性が出る事もあって、それを避けるために培地を変えるなら培地を変える時点で細胞はストレスに晒されていると考えられるのですぐにはトリプシンなどの処理はしない方がいいでしょう。

reverse transfection と言う方法もあるのでこれなら細胞を撒くと同時に導入が始まり、わざわざ撒きなおす必要もないかもしれません。自身の実験で使えそうか考えてみてはどうでしょうか。

トランスフェクション後の細胞の状態 削除/引用
No.11073-1 - 2022/12/26 (月) 23:51:01 - d
リポフェクション法で一過的な遺伝子導入を行いアッセイに用いたいと思っています。試薬を細胞に添加しトランスフェクションした後、数時間経ってから培地交換を行い、その翌日に撒き直すプロトコルが多く見られます。トランスフェクション当日、培地を交換した後直ぐに撒き直すのは良くないのでしょうか。トランスフェクション後の細胞はやはり不安定だからやめた方がいいのでしょうか。試したことがある方いらっしゃいますか?

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