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(無題) 削除/引用 No.11112-3 - 2023/01/14 (土) 07:56:43 - おお 2 私には専門外なのでわかりませんが、大腸菌にはその酵素がないという前提のように見えますがどうですか？それとも好塩性というのを利用して大腸菌の酵素は働かない条件で測定しているということなのでしょうか。 いずれにしても大抵の測定でないからと言ってゼロを示さないことのほうがたいていです。測定で期待できる活性のレンジに対してどれくらいのシグナルなのか、要するにノイズレベルの測定値の上下を見てないか気になるところです。

(無題) 削除/引用 No.11112-2 - 2023/01/14 (土) 01:58:37 - おお 1 グリセロールストックをしているなら、起こしてクローンを拾わないで増やした場合、発現しない菌がドミナントになることがある。面倒でもストリーキングして、シングルクローン複数個を増殖させた方がいい。 トランスフェクション後、それぞれのクローンで発現しないものがあるなら、その発現が大腸菌にストレスになっている場合もあるが、発現するクローンを拾えば大抵は実験できる。ただし、飛び抜けて発現が高いものは何らかの変な変異など持っている可能性があるから、発現しているものの中で平均的な物が無難。 封入体を作るようなら封入体がどの程度developしているかで、可溶性(マイルドな界面活性剤などでlysateをつく場合)で抽出される量が違うかも知れない。もし菌を直接SDSサンプルバッファーなどの溶解しているならこれは無視してください。

大腸菌でのアミラーゼの発現 削除/引用 No.11112-1 - 2023/01/14 (土) 00:18:50 - やさな、 好塩性酵素を大腸菌で発現させる実験をしています。しかし、その中で問題点がいくつか生じてしまっているのでアドバイスいただけると幸いです。 1.sdspageを行うと目的の酵素と思われるバンドがあったり、なかったりバラバラ 　　→このようなことはよくあることですか？繰り返し実験は行う予定です 2.用いている大腸菌はbl21(de3)でアミラーゼを発現させているのですが、なぜかプラスミドを導入していない大腸菌でアミラーゼ活性が出てしまい、コントロールとして成立しません。なぜでしょうか。 説明がわかりにくくて申し訳ないです。

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