Bio Technical フォーラム

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cell sizeの変化 トピック削除
No.11312-TOPIC - 2023/03/29 (水) 01:51:05 - kkk
ある遺伝子と1つ変異の入った遺伝子を導入したら、変異を導入した細胞のサイズが小さくなりました。浮遊させた状態で比較しています。

が、細胞周期を調べても大きな差はありません。

また、全体のRNAの発現を比較したところ、全く変わらないのですが、こんなことありますか?

3回同じ実験をしたのですが、何かアーティファクトを見ているような気もします。

サイズは直径で20%ほど異なります。体積に換算すると半分くらいになってしまう計算です。
 
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No.11312-5 - 2023/03/31 (金) 03:15:34 - おお
BrdUはDNAに取り込まれます。
ウエスタンブロットはたんぱくを検出する手段です。ただし、サザンブロットをしろという意味ではありません。

BrdUとDNA合成でググればすぐわかると思います。細胞を固定して顕微鏡で見るのが王道ですけど、たぶんLysisして定量できるようなキットも売っていると思います。探してみてはどうですか。

(無題) 削除/引用
No.11312-4 - 2023/03/31 (金) 01:52:08 - kkk
BrdUの取り込みは、westernでの検出ということですか?

(無題) 削除/引用
No.11312-3 - 2023/03/29 (水) 16:34:17 - 2
アクチンフィラメントなど細胞骨格系の再構成などがおきているのかもしれません。

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No.11312-2 - 2023/03/29 (水) 03:00:54 - おお
>全体のRNAの発現を比較したところ、全く変わらないのですが

どの遺伝子も細胞当たり半分の量になっていればプロファイルは変わりませんからね。スプライシングとか変わってたりして。

>細胞周期を調べても大きな差はありません。

G1-S、G2-Mの移行の割合が増えてもS期のDNA合成速度が上がればG1 S Mのポピュレーションは変わりませんけどね。増殖速度などは検討しましたか?あとはBrdUなどの取り込みとか。

cell sizeの変化 削除/引用
No.11312-1 - 2023/03/29 (水) 01:51:05 - kkk
ある遺伝子と1つ変異の入った遺伝子を導入したら、変異を導入した細胞のサイズが小さくなりました。浮遊させた状態で比較しています。

が、細胞周期を調べても大きな差はありません。

また、全体のRNAの発現を比較したところ、全く変わらないのですが、こんなことありますか?

3回同じ実験をしたのですが、何かアーティファクトを見ているような気もします。

サイズは直径で20%ほど異なります。体積に換算すると半分くらいになってしまう計算です。

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