導入試薬は各社昔からいろいろと改良、改善、開発を進めていますので、サンプルとか少量の購入で試してみるといいかもしれません。
Lipofectamineも毒性が低いとされるLipofectamine™ LTXとか２０００、３０００
FugeneだとFugene6とかFugene6HDそのほかメーカーはよく知りませんが調べてみてもいいかもしれません。またテクニカルノートみたいなものにどの細胞に入ったなどデーターもあると思いますのでお考えの細胞でそういう実績があるかないかなどもチェックしてみるといいでしょう。
また、使おうとしている細胞でトランスふぇくしょんしている文献をいくらか集めて読んでみるのも手です。どの試薬を使っているかわかるので。
エレクトロポレーションも昔に比べ進化したものもありますので（nucleofectionとかNeontm NxT Electroporation System（こっちはよく知らない））試せるならやってみてもいいんじゃないでしょうか。ポレーションは結構死ぬけど生き残った細胞には結構入っているからといって使っている人がいたのをおもいだします。
また切れのいい薬剤マーカーなら（Blasticidin、Puromycinなど、ゼオシンはどうかわからないけど）トランスフェクション後、一日、場合によっては半日マーカーにさらしておいて、その後抜くことで導入された細胞を濃縮するというやり方を聞いたことがあります。死細胞をうまく除かないとなんか邪魔感はありますけど、本気で除こうとおもうならパーコールとか使ってもいいかもしれません。
そのた工夫するならLargeT antigenを前もって発現しておけばSV40oriのあるプラスミドは細胞内で増殖するので発現に有利な可能性があります。LargeT antigenが研究の邪魔にならないならやってみてもいいのかもしれません。
ウイルス１択ではないものの、条件やあれこれやってどれがいいか評価しないといけないとなるとウイルスベクターにしてしまったほうがスムーズかもしれません。 |
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