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(無題) 削除/引用 No.11483-12 - 2023/06/11 (日) 13:21:01 - kokoko >まあさん ありがとうございます。 調べましたら、文献では透析は3.5Da以下でした。

(無題) 削除/引用 No.11483-11 - 2023/06/08 (木) 13:55:16 - まあ 大昔のデータを引っ張り出してみたら、105,000×gで4時間でした。kokokoさんの条件とそんなに変わらない感じですね。 透析膜のポアサイズは不明です。なにせ大昔なもんで…。

(無題) 削除/引用 No.11483-10 - 2023/06/08 (木) 12:27:56 - kokoko ＞まあさん 追加で質問があります。 透析は、分画分子量がどのくらいの膜を使用しましたでしょうか？ 質問ばかりですみません。 よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.11483-9 - 2023/06/08 (木) 12:01:31 - kokoko ＞まあさん 教えていただきましてありがとうございます。 まあさんは、超遠心は何×gで何分で行いましたでしょうか？ 私はPCP法で精製する時に、100,000×g、４時間で行いました。 しかし、沈殿がはがれやすいので、もっと×gを高めた方が良いのではないかと思いましてお聞きしています。 よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.11483-8 - 2023/06/07 (水) 18:09:01 - まあ かなり昔ですが、結構ラージスケールで以下のようにやっていました。 熱フェノール処理→水層を透析→エバポレーターで濃縮→超遠心で沈殿 超遠心で沈殿させたものを細胞にかけたりしたことはありませんのでどうなるかは不明です。 ポリミキシンB-アガロースにLPSを吸着させた後溶出させることができた気がします。

(無題) 削除/引用 No.11483-7 - 2023/06/07 (水) 17:32:32 - kokoko ＞おおさん ありがとうございます。 ＞まあさん コメントありがとうございます。 熱フェノール処理後の水層より超遠心でLPSを沈殿させたものは、培養細胞に添加しても問題ないでしょうか？熱フェノール処理だけだと、培養細胞添加には適さないと聞いたことがあります。

(無題) 削除/引用 No.11483-6 - 2023/06/07 (水) 15:35:14 - まあ 熱フェノール処理後の水層より超遠心でLPSを沈殿させたことがあります。

(無題) 削除/引用 No.11483-5 - 2023/06/07 (水) 00:01:51 - おお ＞A２６０から２８０は、LPSへの核酸の混入ということでしょうか？ あ、あ、２８０はたんぱくの吸収のピークです。

(無題) 削除/引用 No.11483-4 - 2023/06/04 (日) 09:06:41 - おお 言うまでもありません。

(無題) 削除/引用 No.11483-3 - 2023/06/03 (土) 20:45:33 - kokoko >おおさん 教えていただきまして、ありがとうございます。 A２６０から２８０は、LPSへの核酸の混入ということでしょうか？ よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.11483-2 - 2023/06/02 (金) 03:17:27 - おお それぞれの純度はどうでしょうか？純度が上がった、あるいは不純物として検出されるものが減ったから全体的な量が目減りしているという可能性はないでしょうか？A２６０から２８０の吸収は調べましたでしょうか？いずれにしろ純度の指標を持つことが大事かと思います。 以下の論文では、PCP法の後にDNase RNase,ProteinaseK処理をして透析しています。これならあなたが精製したホットフェノール水抽出法のサンプルからでもさらに精製ができると思います。LPS以外の多糖は除けないでしょうけど（そういう成分が問題になると思うなら違う方法を取らないといけないでしょうね）。 https://www.mdpi.com/1422-0067/23/3/1204 そのた、精製キットなど商品があるようです。キットの特性を理解したうえで購入してみてもいいかもしれません。

LPS(リポポリサッカライド)の精製 削除/引用 No.11483-1 - 2023/06/01 (木) 22:06:13 - kokoko ある細菌からLPS(リポポリサッカライド)の精製を行っています。 最初は、ホットフェノール水抽出法でLPSを精製しました。 しかし、この方法は不純物が多いと、学会発表でコメントをもらいました。 そこで、PCP法でLPSを精製したところ、LPSが精製はできましたが、ホトフェノール水抽出法に比べて、精製できたLPS量がかなり少なかったです。 他に純度が高くて、精製量が多くなるような方法はありますでしょうか。 あるいは、ホットフェノール水抽出法で精製したLPSの純度を高める方法はありますでしょうか。 よろしくお願いいたします。

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