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マウスオンマウス免疫染色 トピック削除
No.11614-TOPIC - 2023/07/14 (金) 19:12:30 - TS
いつも勉強させていただいております。
標記の件、マウスの組織をマウスモノクローナル抗体で染色しようとすると、内在性IgGによりバックグラウンドが高くなることがあると思います。
これまでウサギ/ヤギ抗体の組み合わせや、抗体の蛍光色素標識で二重染色をしたりしてきましたが、ヤギの抗体はバラエティが少ないこと、抗体の標識もめんどくさかったりシグナル不足になることがあったりで、マウスオンマウスを考えようと思いました。

いくつか方法があるようですが、抗マウスF（ab）フラグメント抗体による内在性IgGのブロッキングはどうかと考えています。ご経験のある方で、どのくらいバックグラウンドを低減できるのか、うまくできるのはどのくらいの割合かなど教えていただけませんでしょうか。

おすすめのブロッキング抗体がありましたら教えていただけませんでしょうか。
少し調べたら、コスモバイオで以下のものが比較的安く見つかりました。

Mouse-to-Mouse ブロッキング試薬
ScyTek Laboratories

よろしくお願いいたします。
　
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(無題) 削除/引用
No.11614-5 - 2023/07/19 (水) 15:45:45 - TS
てってってーさん、88さん

ありがとうございます。抗体によりけりなんですね。そんな雰囲気かなとは感じていたのですが、これは二次抗体によりけりなんでしょうか。ブロックする原理的には、一次抗体にはあまり依存しないとは思うのですが、S/N比の問題もあるから、強く染まる抗体ならバックグラウンドも気になりにくいし、もともとシグナルが弱い染色だと、バックが目立ちやすいというイメージでしょうか。


あqswでrftgyふいおpさん

ありがとうございます。標識は時々やるのですが、シグナルの問題があったり、それほど繰り返し染める予定がなかったりすると、標識するものもったいないなぁと思ったりしてしまっています。他に手がない時は標識しようと思います。

(無題) 削除/引用
No.11614-4 - 2023/07/19 (水) 15:04:27 - 88
VECTOR M.O.M.Immunodetection Kit は抗体によりけり

(無題) 削除/引用
No.11614-3 - 2023/07/19 (水) 11:05:04 - てってってー
私が使った中では
vectorのMoM blocking bufferを室温1時間、MoM 2次抗体で検出したことはあります。抗体によってはそれなりに効果を感じます。
他にはニチレイのマウスステインキットをプロトコル通りに使ったりしますが、こちらもそれなりに効果を感じます。
vectorのMoMの方はキットとしても売られてるのですがキット通りに実施すると厚めの切片の表層しか染められなかったので、パラフィン切片とかじゃないとイマイチかもです。
どちらも効果のほどは組織、抗体に依存してるような感じがしてますので、全てにうまくいくわけではないかもしれませんが参考まで

(無題) 削除/引用
No.11614-2 - 2023/07/18 (火) 14:03:50 - あqswでrftgyふいおp
1次抗体を蛍光あるいは酵素（HRPなど）で自分で標識して、２次抗体を使わずに行う方法はよく使われます。蛍光標識も酵素標識もいずれも標識Kitが販売されていて説明書どうりにやればいいだけで簡単です。欠点は反応が１段階なので2次抗体を使用する場合とくらべて増感できないことで感度がやや落ちることがあるかもしれない点です。ある程度の存在量があるものならばあまり関係ないですが、もともと微量のものを検出するということでしたら条件を少し検討する必要があるかもしれません。また後者の場合は感度的に劣る蛍光標識よりも酵素標識の方を勧めます。

マウスオンマウス免疫染色 削除/引用
No.11614-1 - 2023/07/14 (金) 19:12:30 - TS
いつも勉強させていただいております。
標記の件、マウスの組織をマウスモノクローナル抗体で染色しようとすると、内在性IgGによりバックグラウンドが高くなることがあると思います。
これまでウサギ/ヤギ抗体の組み合わせや、抗体の蛍光色素標識で二重染色をしたりしてきましたが、ヤギの抗体はバラエティが少ないこと、抗体の標識もめんどくさかったりシグナル不足になることがあったりで、マウスオンマウスを考えようと思いました。

いくつか方法があるようですが、抗マウスF（ab）フラグメント抗体による内在性IgGのブロッキングはどうかと考えています。ご経験のある方で、どのくらいバックグラウンドを低減できるのか、うまくできるのはどのくらいの割合かなど教えていただけませんでしょうか。

おすすめのブロッキング抗体がありましたら教えていただけませんでしょうか。
少し調べたら、コスモバイオで以下のものが比較的安く見つかりました。

Mouse-to-Mouse ブロッキング試薬
ScyTek Laboratories

よろしくお願いいたします。
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