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TET-on/off システム トピック削除
No.11626-TOPIC - 2023/07/19 (水) 11:55:29 - モレキュラー実験
モレキュラー実験に詳しい先生ご回答をお願いします。

TET-onシステムを含むプラスミドの構築を考えているのですが、addgeneでTRE-tight promoter配列を含むプラスミドを検索していると、よくtight-TRE配列の前にCAP bindingサイトとlac promoterサイトが付いていることがあります。察するにラクトースオペロン関連の配列だと思われるのですが、これってtight-TRE配列に対してどんな意味を持つのでしょうか? あと普通にTREによるTET-onシステム入りのプラスミドを作る場合、このCAP bindingサイトとlac promoterサイトはなくてもいいのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.11626-6 - 2023/07/20 (木) 07:52:18 - Ggr
開発の経緯に由来します
https://www.addgene.org/collections/tetracycline/

(無題) 削除/引用
No.11626-5 - 2023/07/20 (木) 02:38:12 - おお
https://www.addgene.org/50005/
pUC19のマップ

(無題) 削除/引用
No.11626-4 - 2023/07/20 (木) 02:10:55 - おお
momoさんの指摘のようにpUC19というクローニングベクターのマルチクローニングサイトあたりにtight-TRE配列を挿入したという事で、関係ない配列が残っているだけでしょうね。pUC19自体、哺乳動物では何の役割も持ってないですから。ただ、まったく意味のない配列でもまれにいい影響(場合によっては悪い影響)が見られるという事はあります。

ほかの似たようなTet-onのベクターなどと比べてみるといいかと思います。

TET-on/off システム 削除/引用
No.11626-3 - 2023/07/19 (水) 19:17:38 - モレキュラー実験
返信ありがとうございます。
一例としてPlasmid#19408とかがそうですが、TRE-Tightでin plasmid検索すると多くのコンストラクトにCAP bindingサイトとlac promoterサイトがtight-TRE promoterの前についています。

(無題) 削除/引用
No.11626-2 - 2023/07/19 (水) 15:37:08 - momo
たぶんバックボーンになっているのがblue/white selectionできるような汎用ベクター(pUCとかpBluescriptとか)だということだと思います。具体的なAddgene Plasmid #を示していただければ、確かなことがわかると思います。

TET-on/off システム 削除/引用
No.11626-1 - 2023/07/19 (水) 11:55:29 - モレキュラー実験
モレキュラー実験に詳しい先生ご回答をお願いします。

TET-onシステムを含むプラスミドの構築を考えているのですが、addgeneでTRE-tight promoter配列を含むプラスミドを検索していると、よくtight-TRE配列の前にCAP bindingサイトとlac promoterサイトが付いていることがあります。察するにラクトースオペロン関連の配列だと思われるのですが、これってtight-TRE配列に対してどんな意味を持つのでしょうか? あと普通にTREによるTET-onシステム入りのプラスミドを作る場合、このCAP bindingサイトとlac promoterサイトはなくてもいいのでしょうか?

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