BioTechnicalフォーラム [TBE析出]

TBE析出

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No.11628-TOPIC - 2023/07/20 (木) 06:54:47 - おお

TBEは５ｘのストックなどのレシピが出回っていますが、実際よく析出してきます。どれくらいの濃さぐらいならそういう析出が防げるのかなぁと思いました。どうでしょう？
　

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No.11628-11 - 2023/07/25 (火) 02:47:07 - おお

オートクレーブは考えてみます。析出しても再溶解できるなら手っ取り早いかもしれませんね。

(無題)

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No.11628-10 - 2023/07/24 (月) 14:37:48 - おお

皆さんコメントありがとうございます。細かいところで気がついとことなど、有れば後程にいたします。

(無題)

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No.11628-9 - 2023/07/22 (土) 09:40:44 - ---

調整後にオートクレーブをかければ析出し始めるのをかなり遅らせることは出来ます。その状態で使わずにおいている分にはほとんど析出しないと思います。フィルターを通せばもっと良いのかもしれません。
析出が気になるならある程度小分けにしておくのも良いのでは？析出してもオートクレーブにかければ溶解します。あまり繰り返しオートクレーブにかけるのは良くないかもしれませんけど。

そもそもTBEの析出はよっぽど酷くなければそれほど気にしなくても良いとは思いますが。

何度もすいません

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No.11628-8 - 2023/07/22 (土) 00:25:13 - SYBR master

>No.11628-3 - 2023/07/20 (木) 09:50:07 - G25
10x TBEは各社から販売されていますが、そうそう析出されては売り物にならないですよね。ABIのスラブゲルシークエンサーでは指定の10x TBE製品を使っていましたけど、これも析出の問題はなかったと記憶します。
ちゃんと作ってちゃんと保存すれば10xだって大丈夫ということですよね。

脱イオン化を2回下したdwを蒸留処理を2回したddDW(化学に近い研究室でしたので）で作成した20xTBEは、沈殿した記憶は無いです。取り扱いも結構雑だった記憶がありますが、沈殿に悩まされた記憶は無いです。

なので多分これって、作成するdDWの純度に依存するんでは無いかと、経験的に思っています。

(無題)

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No.11628-7 - 2023/07/22 (土) 00:18:12 - SYBR master

>[Re:3] G25さんは書きました :
> 10x TBEは各社から販売されていますが、そうそう析出されては売り物にならないですよね。ABIのスラブゲルシークエンサーでは指定の10x TBE製品を使っていましたけど、これも析出の問題はなかったと記憶します。
> ちゃんと作ってちゃんと保存すれば10xだって大丈夫ということですよね。
>
>
> フィルターするのは半ば常識かと思っていましたが、
> ネットでざっといくつかのレシピを見たところ、そう書かれていたものは見つかりませんでした。滅菌するためにオートクレーブまたはフィルターするというのはありましたけど。
>
>
>

(無題)

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No.11628-6 - 2023/07/22 (土) 00:06:30 - SYBR master

すいません、一個前のやつ削除できませんでした。

>[Re:4] おおさんは書きました :
> >フィルターしたこともあったんですけどね。たぶん容器の口に乾いて粉になったやつとか混入したせいか（まあまあ長持ちしたとおもうのですが）やはり析出したりすることがありました。
>
> ならもう薄いやつをでっかいポリタンクにでもためたほうがええかなぁと思った次第です。

解りますｗ、ただうちは最近はTBEを使わない方向に動いています。学生とかに説明しても。毎年説明しなくてはいけなくなるので、マジで面倒なのでTBEはアクリルアミドゲル使うときにしか使用しなくなりました。また、最近はアクリルアミドゲルもSDS抜いたトリスグリシンで泳動しています。

>[Re:3] G25さんは書きました :
> 10x TBEは各社から販売されていますが、そうそう析出されては売り物にならないですよね。ABIのスラブゲルシークエンサーでは指定の10x TBE製品を使っていましたけど、これも析出の問題はなかったと記憶します。
> ちゃんと作ってちゃんと保存すれば10xだって大丈夫ということですよね。

> フィルターするのは半ば常識かと思っていましたが、
> ネットでざっといくつかのレシピを見たところ、そう書かれていたものは見つかりませんでした。滅菌するためにオートクレーブまたはフィルターするというのはありましたけど。

filtrationしていても(それも0.1 umでっせ）、沈殿し始めるんですよね(大学来てからは）。使い方が、学生や院生だと結構アバウトなので(G25さん嫌いですよね、このようなの)沈殿しやすいんですよ。もちろん色々な、詳しい説明していますけど、他の方法考えた方が(マジで沈殿しているバッファー使う猛者が学生や院生には居るので)エラーが少ないんです。

ただ、オートクレーブで析出沈殿が解けるのは結構有り難かったりしています。オートクレーブ後、暫く析出沈殿起こさない、何かよく解らないメカニズムですけど。

(無題)

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No.11628-5 - 2023/07/21 (金) 23:46:48 - SYBR master

>[Re:4] おおさんは書きました :
> フィルターしたこともあったんですけどね。たぶん容器の口に乾いて粉になったやつとか混入したせいか（まあまあ長持ちしたとおもうのですが）やはり析出したりすることがありました。
>
> ならもう薄いやつをでっかいポリタンクにでもためたほうがええかなぁと思った次第です。

>[Re:2] G25さんは書きました :
> メンブレンフィルターで脱粒子はしてますか？
>
> 核となる微粒子があると析出するので、孔径0.4あるいは0.2 umのメンブレンフィルターで吸引ろ過します。
> 保存容器にもゴミ、ホコリや前に入れていた溶液の析出物がこびりついていたりするので、ディスポのフィルターユニットを利用し、付属のボトルでそのまま保存するのが理想的。洗浄したガラスボトル等を使うなら、アルカリ洗浄などして徹底的にきれいにします。
>
> TBEを常備していたのはスラブゲルでシークエンスしていたころの話ですが、
> フィルターするようになってからは10xストック溶液でも析出せずに回っていました。

(無題)

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No.11628-4 - 2023/07/20 (木) 10:27:18 - おお

フィルターしたこともあったんですけどね。たぶん容器の口に乾いて粉になったやつとか混入したせいか（まあまあ長持ちしたとおもうのですが）やはり析出したりすることがありました。

ならもう薄いやつをでっかいポリタンクにでもためたほうがええかなぁと思った次第です。

(無題)

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No.11628-3 - 2023/07/20 (木) 09:50:07 - G25

10x TBEは各社から販売されていますが、そうそう析出されては売り物にならないですよね。ABIのスラブゲルシークエンサーでは指定の10x TBE製品を使っていましたけど、これも析出の問題はなかったと記憶します。
ちゃんと作ってちゃんと保存すれば10xだって大丈夫ということですよね。

フィルターするのは半ば常識かと思っていましたが、
ネットでざっといくつかのレシピを見たところ、そう書かれていたものは見つかりませんでした。滅菌するためにオートクレーブまたはフィルターするというのはありましたけど。

(無題)

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No.11628-2 - 2023/07/20 (木) 09:21:24 - G25

メンブレンフィルターで脱粒子はしてますか？

核となる微粒子があると析出するので、孔径0.4あるいは0.2 umのメンブレンフィルターで吸引ろ過します。
保存容器にもゴミ、ホコリや前に入れていた溶液の析出物がこびりついていたりするので、ディスポのフィルターユニットを利用し、付属のボトルでそのまま保存するのが理想的。洗浄したガラスボトル等を使うなら、アルカリ洗浄などして徹底的にきれいにします。

TBEを常備していたのはスラブゲルでシークエンスしていたころの話ですが、
フィルターするようになってからは10xストック溶液でも析出せずに回っていました。

TBE析出

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No.11628-1 - 2023/07/20 (木) 06:54:47 - おお

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