Bio Technical フォーラム

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レポーター遺伝子アッセイについて トピック削除
No.11637-TOPIC - 2023/07/21 (金) 10:40:05 - こんの
こんにちは。
本年度より大学院に進学をし、新たなテーマ―のもと実験を組み立てているところです。

現在GPCR(Gαq)を介するシグナル伝達を惹起さる成分についてreporter gene assayを用い探索しようとしているところなのですが、
指導教官が入院してしまいあまり連絡が取れず、また当研究室には院生がおりません。
さらに本学科の教員はほとんどが調査研究を主な仕事としているため誰に聞くこともできない状態となっています。

教官は8月中旬ごろ復職予定だそうで、それまでに実験方法についてもう少し明確にしておきたいと考えております。
現在以下の手順で実験を進めていこうとしております。

・標的としているGPCRが恒常的に発現するHEK293T細胞を作成する。

・上記の細胞に標的GPCRのリガンドとなる物質が結合した際蛍光(?)を発する配列を組み今度プラスミドをトランスフェクションする。

Gαq型のGPCRが活性化されると下流の経路としてNFAT-REによって遺伝子の転写が誘導されるとありました。
NFAT-REを組み込んだプラスミドを作成すればいいのでしょうか。

初心者過ぎて分からないことばかりで申し訳ございませんが、どなたかご教示いただけたら幸いでございます。
どうぞよろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.11637-2 - 2023/07/21 (金) 11:53:24 - おお
あの、、、これ解説しようとするとあなたの今の知識を考えると生化学かなんかの講義みたいな話になってしまってとりとめもなくなるから、なるべくなら似た実験をしている論文を読むと同時に、ルシフェラーゼアッセイ(転写活性を見るためのものでリポーターアッセイの一つ)、NFAT-REによって転写が促進されるメカニズム(仕組みどんなタンパクとかがどのようにかかわって転写が促進されるのか)などまずは調べてください。

レポーター遺伝子アッセイについて 削除/引用
No.11637-1 - 2023/07/21 (金) 10:40:05 - こんの
こんにちは。
本年度より大学院に進学をし、新たなテーマ―のもと実験を組み立てているところです。

現在GPCR(Gαq)を介するシグナル伝達を惹起さる成分についてreporter gene assayを用い探索しようとしているところなのですが、
指導教官が入院してしまいあまり連絡が取れず、また当研究室には院生がおりません。
さらに本学科の教員はほとんどが調査研究を主な仕事としているため誰に聞くこともできない状態となっています。

教官は8月中旬ごろ復職予定だそうで、それまでに実験方法についてもう少し明確にしておきたいと考えております。
現在以下の手順で実験を進めていこうとしております。

・標的としているGPCRが恒常的に発現するHEK293T細胞を作成する。

・上記の細胞に標的GPCRのリガンドとなる物質が結合した際蛍光(?)を発する配列を組み今度プラスミドをトランスフェクションする。

Gαq型のGPCRが活性化されると下流の経路としてNFAT-REによって遺伝子の転写が誘導されるとありました。
NFAT-REを組み込んだプラスミドを作成すればいいのでしょうか。

初心者過ぎて分からないことばかりで申し訳ございませんが、どなたかご教示いただけたら幸いでございます。
どうぞよろしくお願い致します。

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